腺病毒介導轉染人生長轉化因子β1的脂肪干細胞復合多孔β-磷酸三鈣支架體外培養的研究

作者:方忠; 楊琴; 熊偉; 李光輝; 肖駿; 李鋒 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院骨科; 武漢430030

摘要:目的觀察腺病毒介導轉染人生長轉化因子β1(Ad—hTGF—β1)的脂肪干細胞(ADSCs)與多孔β-磷酸三鈣(β-TCP)支架材料在體外復合培養,探討它們之間的相容性以及其構建組織工程軟骨的可行性。方法含增加型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的腺病毒表達載體pAd—hTGF-β1,經包裝、轉染兔脂肪干細胞,篩選出成功轉染Ad—hTGF-β1的ADSCs,然后將攜Ad—hTGF—β1的ADSCs(密度1×10^6個/m1)與多孔β-磷酸三鈣支架中行三維立體復合培養,定期掃描電鏡觀察細胞黏附能力、增殖活力以及形態學改變,并通過逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT—PCR)、Western blot法和免疫組織化學法檢測軟骨特異性細胞外基質蛋白Ⅱ型膠原蛋向(CollagenⅡ)的表達。結果多孔β—TCP支架孔徑在300~450μm之間,孔隙率65%;掃描電鏡顯示Ad—hTGF-β1的ADSCs與β—TCP支架材料在體外培養期間支架無塌陷及形變,且在支架上黏附、增殖良好,并能分泌軟骨細胞外基質collagen Ⅱ,其分泌隨時間呈增加的趨勢。結論多孔β—TCP支架具有適宜的微孔結構、良好的生物相容性和軟骨誘導作用,可以作為軟骨組織工程較理想的支架材料。且其與轉染Ad—hTGF—β1的ADSCs相結合有望構建組織工程軟骨。

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