摘要:目的建立可進行條件性敲除X-盒結合蛋白1(Xbp1)基因的flox雜合子小鼠。方法通過ET-clone的方法構建基于cre-loxp系統和FLP-frt系統的條件性基因打靶載體。載體線性化后電轉JM8A3 ES細胞,經G418和Ganc篩選獲得抗性ES細胞克隆。經長片段PCR鑒定獲得正確同源重組的陽性克隆。陽性ES細胞經克隆擴增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,獲得嵌合鼠,篩選出高比例嵌合小鼠與野生型C57BL/6J小鼠交配后獲得陽性F1代小鼠,并分別進行PCR和測序鑒定。結果成功構建打靶載體,共獲得144個抗性ES細胞,克隆經長片段PCR鑒定,共獲得4個正確同源重組的陽性克隆。獲得4只陽性F1代小鼠,經測序鑒定正確。Xbp1基因flox雜合子小鼠表型無明顯異常。結論成功構建了條件性敲除Xbp1基因的flox雜合子小鼠,為未來研究器官或組織特異性的Xbp1生物學作用奠定了基礎。
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