基于宏基因策略的新穎木聚糖酶基因cbxynA克隆及其重組酶酶學性質

作者:熊科; 崔曉亭; 王小藝; 趙峙堯; 柳佳蕓; 裴鵬剛; 鄧蕾; 熊蘇玥 北京工商大學北京市食品添加劑工程技術研究中心; 北京100048; 北京工商大學北京食品營養與人類健康高精尖創新中心; 北京100048; 北京工商大學北京市質量與安全重點實驗室; 北京100048; 北京工商大學北京市風味化學重點實驗室; 北京100048

摘要:研究構建了庫容量約為1.3×10^4個克隆子且外源片段的總長為30Mb的土壤宏基因組文庫。基于功能策略,從文庫中篩選到分解木聚糖底物的陽性克隆子。該克隆經序列分析發現一個822bp的潛在的編碼木聚糖酶基因(cbxynA)的開放閱讀框,其編碼的氨基酸序列與來自古細菌屬編碼的木聚糖酶的相似度最高僅為45%,說明該序列為一條未知的新序列。cbxynA在大腸桿菌中的重組表達產物的分子質量為29ku,與預測結果一致。對其原核表達條件進行優化,結果表明:質粒在培養5h后加入0.7mmol/LIPTG,23℃下誘導25h后表達,木聚糖酶活力為52U/mL,較初始值提高4.3倍。而重組酶(CBXYNA)最適pH和最適溫度分別為5.2和55℃。金屬離子Na^+、K^+、Li^+、Ca^2+能提高該酶的酶活,而另外一些金屬離子如Mg^2+、Mn^2+、Zn^2+、Fe^3+、Al^3+、Cu^2+能抑制其活性。該酶以水溶性玉米芯木聚糖、燕麥木聚糖、水不溶性木聚糖為底物時,其相對酶活力分別為162%,139%,74%。

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