摘要：目的構建結核分枝桿菌Rv1787基因的原核表達質粒進行體外表達,運用生物學信息分析方法分析Rv1787基因編碼蛋白PPE25的生物學特征。 方法以結核分枝桿菌H37Rv基因組DNA為模板,PCR法擴增Rv1787基因,并與表達載體pET-32a構建重組質粒。原核表達重組質粒,SDS-PAGE分析表達產物并利用親和層析的方法進行純化。利用生物信息學軟件ProtParam分析PPE25蛋白的理化性質,TMPRED和SignalP4.1Service預測蛋白的跨膜區和信號肽,NPS@SOPMA和Swissmodel分別預測蛋白的二級結構和三級結構,Bepipred 1.0bserver和DNAStar綜合預測蛋白的B細胞抗原表位,綜合運用SYFPEITHI、BIMAS、NetCTL、RANKPEP、NetMHCⅡPAN 4.0server預測蛋白的CTL細胞表位,綜合運用SYFPEITHI、RANKPEP、NetMHCⅡpan 3.2server預測蛋白的Th細胞表位。 結果pET-32a-Rv1787重組質粒測序結果與目的基因完全一致;SDS-PAGE分析表明,該融合蛋白以包涵體形式存在,相對分子質量為56×10^3,與預期大小相符。生物信息學分析結果顯示,PPE25蛋白為疏水性蛋白,含多個跨膜結構域,無信號肽。二級結構主要由α-螺旋和無規則卷曲構成,結構比較松散。綜合多種表位預測軟件分析結果,篩選出3個優勢B細胞抗原表位,7個CTL優勢抗原表位和9個Th優勢抗原表位。 結論成功構建結核分枝桿菌PPE25蛋白編碼基因Rv1787重組原核表達質粒,并利用生物信息學篩選出多個優勢抗原表位,為進一步研究PPE25蛋白在結核病發生發展中的作用奠定了基礎。