樁蛋白基因克隆及其在肝癌細胞Hep G2中的作用
作者：孫達權; 石靜; 石松; 薛殿婷; 徐瑩瑩 貴州醫科大學基礎醫學院; 貴陽550025
摘要：目的克隆樁蛋白基因(PXN)的蛋白編碼區并構建PXN基因真核表達載體,建立PXN穩轉肝癌細胞株,分析PXN基因對肝癌細胞的作用.方法Trizol法提取肝癌細胞總RNA并逆轉錄成cDNA,PCR法擴增PXN基因蛋白編碼區并構建真核表達質粒pEBFP-PXN.脂質體法轉染肝癌細胞HepG2,G418篩選培養獲得樁蛋白高表達穩轉肝癌細胞株.實時無標記細胞分析檢測細胞生長速率,細胞創傷-愈合實驗分析細胞遷移速率.蛋白免疫印跡法檢測細胞內蛋白表達變化.結果成功克隆PXN基因并構建真核表達載體pEBFP-PXN.獲得樁蛋白高表達單克隆穩轉肝癌細胞株,胞內顯示藍色熒光,蛋白免疫印跡法顯示穩轉株內表達外源融合蛋白BFP-PXN.樁蛋白表達不影響HepG2肝癌細胞的生長速率但可以抑制其細胞遷移,穩轉細胞上皮標志蛋白E-Cadherin表達升高、間質標志物N-Cadherin和Vimentin表達下降.結論PXN基因不影響HepG2肝癌細胞生長增殖速率但可以抑制其細胞遷移,這可能與其可以影響肝癌細胞上皮-間質轉化標志蛋白表達有關.
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