摘要：為探討中國綠水螅(Hydra sinensis)抗壞血酸過氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中國綠水螅APX基因的全長cDNA序列。該cDNA序列總長1357 bp,包括5′非編碼區107 bp,3′非編碼區146 bp及開放閱讀框(Open reading frame,ORF)1104 bp,共編碼367個氨基酸,預測蛋白質分子量為40.79 kD。BLAST結果表明中國綠水螅APX蛋白同源序列絕大部分來自植物界;通過最大似然法(Maximum-likelihood)和貝葉斯分析(Bayesian inference)進行的系統發生分析顯示植物界及動物界物種的APX序列各自形成單系群。把APX基因ORF全長序列克隆到原核表達質粒pET-GST中,重組質粒轉化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG誘導后成功表達重組融合蛋白GST-APX,再使用純化的重組蛋白免疫新西蘭兔制備多克隆抗體用于APX蛋白的免疫印跡分析(Western blotting assay,WB)。在不同光照時長梯度(光強度2000 lx,每天分別光照0、4h、8h、12h、16h、20h及24h)下培養中國綠水螅30d,實時定量PCR(Quantitative real-timePCR,qPCR)及WB檢測結果均表明光照時間較長時(每天光照12h以上)綠水螅APX表達呈現一定程度的上調。在長時間光輻射下水螅體內共生綠藻連續進行光合作用所累積的大量活性氧能夠擴散到水螅細胞內,此時水螅體內表達上調的APX可能參與清除其細胞內的活性氧。