摘要:為了探討日本血吸蟲成蟲抗原(SWA)對LX-2細胞NLRP3炎癥小體活化和纖維化相關基因表達的影響,以及活性氧(ROS)在其中的作用,本文首先采用不同濃度(0、25、50、100μg/mL)的SWA刺激LX-2細胞,通過實時熒光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot檢測細胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的基因和蛋白表達,ELISA檢測細胞IL-1β 的分泌水平;同時使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測細胞活性,乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒檢測細胞LDH的釋放;流式細胞術檢測SWA刺激對LX-2細胞中ROS產生的影響;之后使用ROS清除劑N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)處理細胞,檢測NLRP3、IL-1β、Caspase-1、 α-SMA、ColⅠ基因和蛋白的表達水平.結果顯示,當SWA的濃度達100μg/mL時,LX-2細胞內NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的mRNA的表達與對照組相比均明顯升高,同時相關蛋白的表達和IL-1β的分泌也顯著升高.流式檢測結果顯示,SWA刺激LX-2細胞后能顯著增加細胞內ROS的生成,并在NAC處理后,可見明顯抑制細胞內ColⅠ和炎癥小體活化相關的基因和蛋白的表達.結果提示,SWA可以誘導LX-2細胞內炎癥小體活化和膠原表達,并且ROS反應可能在介導NLRP3活化中發揮重要的作用.
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