摘要:【目的】探討白羽王鴿Columba livia骨骼肌衛星細胞的分離、培養和鑒定的方法,建立完整的家鴿骨骼肌衛星細胞的培養體系。【方法】選擇孵化16d的鴿胚作為試驗材料,采用組織塊貼壁法和膠原酶消化法分離胸肌的骨骼肌衛星細胞并繪制其生長曲線。待衛星細胞分化出肌管后,采用免疫熒光法檢測肌球蛋白重鏈(MyHC)的表達;在細胞分化出肌管前、后分別提取總RNA,采用RT-qPCR方法檢測Desmin、Pax7、MyoG和MyoD1基因在細胞分化出肌管前、后的相對表達量。【結果】組織塊貼壁法和膠原酶法均能成功地分離出骨骼肌衛星細胞,其生長曲線呈“S”型;該細胞經含體積分數為20%FBS的DMEM高糖培養液培養7d后視野中出現大量明顯可見的肌管,成肌特異性標志MyHC表達呈陽性。RT-qPCR結果表明,Desmin和MyoG基因分化后的相對表達量分別是分化前的5.68和10.38倍,而Pax7和MyoD1基因分化前的相對表達量分別是分化后的7.01和5.51倍。【結論】建立了鴿骨骼肌衛星細胞的培養體系,為今后進行家鴿肌肉發育的研究提供細胞模型。
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