摘要:目的:研究干細胞定向分化為內皮細胞的效率,并與人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)比較。方法:用兩步法誘導干細胞HUES9分化為內皮細胞,前3 d在N2B27培養基中加入骨形態發生蛋白4(25 ng/m L)和肝糖原合成激酶3β受體的選擇性抑制劑CHIR99021(10μmol/L)使細胞分化到中胚層狀態,第4天開始用VEGF165(200 ng/m L)和Forskolin(2μmol/L)將細胞誘導為內皮細胞。觀察分化第6天細胞形態,并與HUVECs比較。用CD144作為內皮細胞表面標志物,流式細胞術檢測分化效率及分化后細胞的身份。比較兩種內皮細胞遷移和成管能力。結果:分化后的內皮細胞與HUVECs在顯微鏡下形態一致。分化細胞表面標志物陽性率達到73.4%,重新培養后的內皮細胞表面CD144陽性率達到86.6%,HUVECs為94.4%。分化后的內皮細胞與HUVECs均具有良好的遷移和成管能力,但分化后的內皮細胞能力不如HUVECs強。運用SB431542后,能夠提高分化后內皮細胞的遷移和成管能力。結論:此兩步法將干細胞分化為內皮細胞有較高的分化效率,可作為理想的分化方法。
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