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論文摘要目的:探討糖尿病足中醫辨證分型與血管細胞核增殖相關抗原的表達差異。方法:對32例截肢的糖尿病足患者按中醫辨證分為氣血兩虛瘀阻證、脈絡瘀熱證、脈絡熱毒證和氣陰兩虛瘀阻證,分別對其截肢肢體的脛后動脈應用免疫組化法對細胞核增殖相關抗原(Ki67)的表達進行觀察、分析。結果:Ki67的陽性表達與糖尿病足動脈硬化閉塞程度呈負相關,與血管炎癥病變程度呈正相關。結論:炎癥在糖尿癥的大血管病變的過程中起到了重要的作用。
糠尿病足是糖尿病的嚴重并發癥,據統計1996年全球糖尿病患者1.2億,預計到2025年,將達到2.5億以上,而大約15%的糖尿病患者將在其生活的某一時間發生足潰瘍或壞疽[1]。目前對于糖尿病足病因及發病機制雖然還不是完全清楚,但大家公認糖尿病合并大血管病變導致動脈粥樣硬化是糖尿病足發病的最主要因素?,F將2004年10月~2005年5月間我們收治的32例糖尿病足患者的截肢動脈標本的血管細胞核增殖相關抗原(Ki67)與其中醫辨證分型的相關性研究情況報告如下。
1臨床資料
1.1一般資料:32例均為天津醫科大學代謝病醫院和天津中醫學院第一附屬醫院2004年10月~2005年5月間的住院患者,其中男性24例,女性8例;年齡50~86歲,平均年齡69.2歲;糖尿病病程最長30年,最短6年,平均18±2.4年。
1.2診斷標準:糖尿病足的診斷標準采用2000年中華醫學會糖尿病學會第二屆糖尿病足會議所制訂的“糖尿病足(肢端壞疽)檢查方法及診斷標準”。
1.3截肢標準:參照國際糖尿病足工作組編寫的《糖尿病足國際共識》中關于“大截肢的定義、標準和指標”[2]執行。
1.4中醫辨證分型標準:參照《中醫外科學(第七版)》及《中藥新藥臨床研究指導原則·脫疽》之中醫辨證分型方案分為氣陰兩虛瘀阻證、脈絡瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證、脈絡熱毒證四型。
2觀察方法
2.1標本取材:壞疽截肢標本32例,其中按中醫辨證分型氣血兩虛瘀阻組10例,脈絡瘀熱組10例,氣陰兩虛瘀阻組4例,脈絡熱毒組8例,取各例標本下肢脛后動脈。標本經過10%福爾馬林固定,常規石蠟包埋,備用。
2.2設備、試劑:美國PENGUIN-600CL自動圖像分析系統,細胞核增殖相關抗原(Ki67)抗體PV9000試劑盒DAB購于北京中山生物技術有限公司。
2.3免疫組織化學法:標本常規石蠟包埋,4μm連續切片,采用PV法進行免疫組化染色,染色過程嚴格按試劑盒染色程序進行,選取已知的陽性切片作陽性對照,PBS代替一抗作為陰性對照。觀察細胞核增殖相關抗原(Ki67),陽性物質呈棕黃色細顆粒狀于細胞核表達,采用美國PENGUIN-600CL圖像分析系統進行圖像分析,選取病變處每500個細胞Ki67的陽性表達率作為其陽性表達指數。統計學處理應用SPSS10.0軟件包進行方差分析。
3結果
3.1中醫各證型所占比例以及年齡、性別分布:各證型比例,氣血兩虛瘀阻組10例(31.25%),脈絡瘀熱組10
例(31.25%),氣陰兩虛瘀阻組4例(12.5%),脈絡熱毒組8例(25.0%)。年齡、性別分布情況,見表1。
表132例患者年齡、性別分布n(%)
性別n50~60歲61~70歲71~80歲80歲以上男24(75.0)4(12.5)8(25.0)11(34.4)1(3.1)女8(25.0)1(3.1)3(9.3)4(12.5)0總計32(100.0)5(15.6)11(34.4)15(46.9)1(3.1)3.2免疫組織化學法觀察各證型Ki67表達差異:具體情況見表2。
表2各證型Ki67陽性表達指數比較(%)
證型Ki67陽性表達指數脈絡熱毒4.87±1.01*氣陰兩虛瘀阻1.86±0.47脈絡瘀熱1.49±0.13氣血兩虛瘀阻0.30±0.18注:與氣血兩虛瘀阻型比較,*P<0.05。
氣血兩虛瘀阻證、脈絡熱毒證、脈絡瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中均可見部分細胞Ki67呈陽性表達,在脈絡熱毒證中表達指數最高,氣血兩虛瘀阻證中表達指數最低,二者比較具有顯著性差異(P<0.05)。
4討論
Ki67抗原為細胞核內與細胞分裂增殖相關的蛋白抗原,分子量為345kd和395kd,其編碼基因位于第10號染色體上。Ki67的表達出現于G1中期到晚期,S期和G2期逐漸增加,有絲分裂期達高峰,分裂后迅速降解或丟失抗原決定簇,到G0期則不表達,半衰期為lh或更短[3]。有人認為它可能是具有蛋白結合特性的重要結構,在有絲分裂中起著維持DNA規則結構的重要作用[4],是一個反映細胞增殖的敏感指標。
在糖尿病足的不同辨證分型中氣血兩虛瘀阻證、脈絡熱毒證、脈絡瘀熱證、氣陰兩虛瘀阻證中Ki67表達均呈陽性,在脈絡熱毒證中表達最強、氣血兩虛瘀阻證中表達最弱,二者相比具有顯著性差異(P<0.05)。根據Ki67陽性指數可以判斷細胞增殖的活性,指明細胞增殖與糖尿病足動脈病變的關系。在糖尿病足的不同辨證分型中動脈的硬化閉塞程度由輕到重依次是脈絡熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證、脈絡瘀熱證、氣血兩虛瘀阻證。Ki67的陽性表達與糖尿病足動脈硬化閉塞程度呈負相關。而在通過對32例糖尿病足截肢的動脈進行病理學觀察的過程中發現糖尿病足血管病變主要體現在中動脈的病理學變化,其中脈絡熱毒、氣陰兩虛瘀阻兩證型以動脈周圍及全層的炎癥性改變為主;脈絡瘀熱、氣血兩虛瘀阻證以中膜鈣化、平滑肌細胞萎縮、變性、壞死及膠原纖維增多及內膜粥樣斑塊形成為主,炎癥表現不明顯;而Ki67的陽性指數與血管炎癥病變程度呈正相關。這說明炎癥在糖尿病的大血管病變的過程中起了重要的作用,特別是在脈絡熱毒證、氣陰兩虛瘀阻證兩型,這對臨床具有重要的指導意義。
5參考文獻
1BoultonAJ.Thediabeticfoot:aglobalview.DiabetelMetabResRev,2000,16(1):2.
2許樟榮,敬華.糖尿病足國際共識.中華糖尿病學會第二屆足病第一次足病研討會.2002,435.
【關鍵詞】骨髓內皮細胞GMCSF細胞增殖
EffectsofGranulocyteMacrophageColonyStimulatingFactoronGrowthofMurineBoneMarrowEndothelialCells
AbstractThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)onthegrowthofmousebonemarrowendothelialcells.Endothelialcellculturemedium(EndoM)wasusedtoculturemurinebonemarrowendothelialcells.EndothelialcellcolonieswerecountedundermicroscopebyWrightGiemsastaining.TheeffectofdifferentconcentriationofGMCSFontheproliferationofbonemarrowendothelialcellswasobservedbytheformationofendothelialcellcolonies,MTTandflowcytometry.TheresultsindicatedthattheendothelialspecificmarkervWFwasexpressedbythecolonycells,GMCSFpromotedtheproliferationofbonemarrowendothelialcellcoloniesandMTTconfirmedtheeffectofGMCSFonpromotingtheproliferationofbonemarrowendothelialcells.TheresultofdetectingcellcycleshowedthattherateofcellsenteringintoSphasewas9.3%inGMCSFaddedgroupandtherateofcellsenteringintoSphasewas2.1%incontrol.Therewasnosignificantdifferenceincellgrowthcurvebetweenthefirstpassageandfourthpassage.ItisconcludedthatGMCSFcanpromotetheproliferationofbonemarrowendothelialcells,theproliferationpotentialofbonemarrowendothelialcellsbetweenthefirstandfourthpassagenosignificantlychanges.
Keywordsbonemarrowendothelialcells;GMCSF;proliferation
JExpHematol2007;15(3):622-625
目前,已有許多報道證明內皮細胞(endothelialcells,EC)、內皮祖細胞(endothelialprogenitorcells,EPC)可以用來治療缺血性心臟病以及各種疾病引起的肢體缺血[1,2]也可以用于組織工程的血管構建[3],并取得了一定的成果。Kawamoto等[4]報道,EPC對缺血心臟病進行治療具有良好的效果,一方面減少了缺血組織的面積,同時改善了心臟的功能。Kalka等[5]則報道了利用EPC對肢體缺血的小鼠模型進行治療,實驗結果表明了EPC能顯著增加缺血肢體的灌流,而且組織學檢查發現缺血部位毛細血管的數目也大大增加。內皮細胞的來源有多種,可以從外周血、臍血及骨髓中獲得[6],而外周血中的內皮祖細胞來源于骨髓。從病人自體的骨髓中獲得內皮細胞,一方面來源比較方便,而且也可以避免GVHD的發生。但是由于骨髓基質細胞種類多,難以分離純化骨髓內皮細胞或內皮祖細胞。本研究用本實驗室配制的內皮細胞培養液(EndoM)體外培養小鼠骨髓細胞,分離純化骨髓內皮細胞及內皮祖細胞,并觀察粒巨噬系集落刺激因子(rmGMCSF)對小鼠骨髓內皮細胞體外增殖的影響以及體外增殖后內皮細胞增殖機能的改變,這對臨床運用內皮細胞或內皮祖細胞治療疾病有一定的指導意義。
動物
昆明小鼠,由中南大學湘雅醫學院動物學部提供,雌雄不限,普通飲食。
主要試劑和儀器
IMDM為Gibco公司產品;新生牛血清購自杭州四季清生物制品研究所;重組小鼠粒巨噬細胞集落刺激因子(rmGMCSF)為R&D公司產品;vWF抗體、CY3標記的羊抗兔IgG為Sigma公司產品;MTT、二甲基亞砜(DMSO)為Sigma公司產品;酶標儀為Awarens公司產品;CO2培養箱購自美國Forma。
小鼠骨髓內皮細胞及內皮細胞集落的培養
用頸椎脫臼法處死小鼠,在無菌條件下取出股骨,用IMDM沖出骨髓細胞,制成單細胞懸液,取1×106個小鼠骨髓單個核細胞種入1ml含有15%新生牛血清的EndoM培養體系,置于24孔板中,于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養5天后,用胰蛋白酶消化,制成單細胞懸液,按每孔1×104個細胞種入24孔板,每組3孔。于二氧化碳培養箱內培養15天后計數內皮細胞集落數,以≥50個細胞的聚合計為1個集落。
內皮細胞的形態觀察及vWF的檢測
培養的骨髓內皮細胞集落經WrightGiemsa染色后,顯微鏡下觀察內皮細胞形態。用間接免疫熒光法檢測骨髓內皮細胞vWF。將內皮細胞培養于24孔板內放置的蓋玻片上,當細胞間沒有明顯的間隙時,取出蓋玻片,用PBS清洗,用4%的多聚甲醛固定30分鐘,用PBS洗3次:2%的正常羊血清封閉4小時,加入vWF抗體,4℃過夜,用PBS洗3次,加入二抗CY3IgG,37℃孵育60分鐘,PBS洗3次:置于熒光顯微鏡下觀察。以本室建的小鼠骨髓內皮細胞株[7]為陽性對照,骨髓成纖維細胞為陰性對照。
不同濃度的GMCSF對小鼠骨髓內皮細胞形成集落的影響
取純化的小鼠骨髓內皮細胞培養于24孔板中,每孔5000個細胞,在基本培養體系(含1%濃度EndoM)的基礎上分別加入5、10、25ng/ml的rmGMCSF,對照組不加入GMCSF,每組3孔。置于CO2培養箱培養15天,于倒置顯微鏡下記數集落數,≥50個細胞的聚合計為1個內皮細胞集落。
GMCSF對內皮細胞增殖影響的MTT法測定
將純化的小鼠骨髓內皮細胞按5000個/孔培養于96孔板,每孔0.2ml,每組3孔。實驗組培養體系中分別加入5、25、100ng/ml的rmGMCSF,對照組內不加。在37℃、5%CO2、飽和濕度下分別培養5天和10天,取出培養板吸去培養液,然后加入無血清的IMDM180μl和20μlMTT溶液,放入培養箱孵育4小時,吸去液體,各孔加入DMSO150μl,振蕩10分鐘,使結晶充分溶解。選擇492nm波長,在酶標儀上測定各孔的光吸收值(OD492)。
生長曲線
純化的小鼠骨髓內皮細胞培養于96孔板中,每孔5000個細胞,加0.2ml含15%新生牛血清的基本培養液,并加入25ng/ml的rmGMCSF。共種6組,每組3孔,培養5天后,分別于第7、9、11、13、15天用胰酶消化后計數細胞,每次3孔,求平均值,做出生長曲線。按公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第1代內皮細胞生長的倍增時間。
細胞周期的流式細胞術檢測
無菌條件下取小鼠骨髓單個核細胞,按2×106個細胞種于6孔培養板中(2ml培養體系中含15%新生牛血清的EndoM),置于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養5天,然后吸去培養液,加入兩種不同培養體系,對照組加含15%新生牛血清的IMDM,實驗組加15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF,每組各10孔,置于CO2培養箱培養3天后,用胰酶消化細胞,200×g,離心5分鐘,用PBS洗滌細胞2次之后,用300μlPBS重懸細胞,加入冰冷的乙醇(-20℃)約700μl(終濃度為70%),將細胞放于-20℃過夜處理后,用流式細胞儀檢測細胞周期。
細胞傳代培養
取小鼠骨髓單個核細胞,按2×106個細胞種于6孔培養板中(2ml體系中含15%新生牛血清的EndoM),置于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養5天,然后吸去培養液,加入15%新生牛血清的IMDM培養液和100ng/ml的rmGMCSF,促使細胞融合,再按1∶4傳代于6孔板中,同樣加入15%新生牛血清的IMDM和100ng/ml的rmGMCSF,等細胞生長至融合,按1∶4傳代,加入相同培養體系。按上述方法傳4代后,繪制生長曲線,方法同前。公式DT=t×1g2/(1gN-1gN0)算出第4代內皮細胞生長的倍增時間,并與第1代的倍增時間進行比較。
統計學處理
實驗數據為3次結果,以mean±SD表示。不同處理組兩組間比較采用t檢驗,應用SPSS軟件分析,P<0.05表示有統計學意義。
結果
細胞形態每孔種入小鼠骨髓內皮細胞5000個,對照組加基礎培養液,實驗組在基礎培養液的基礎上分別加入rmGMCSF5、10、25ng/ml。與對照組相比,實驗組集落數均明顯增多(圖3),說明rmGMCSF對小鼠骨髓內皮細胞的增殖有明顯刺激作用。
rmGMCSF對內皮細胞增殖的影響
小鼠骨髓內皮細胞培養5、10天,分別進行MTT的檢測,結果表明rmGMCSF對小鼠骨髓內皮細胞生長促進作用明顯,各組與對照組相比差異顯著(P<0.01)(圖4)。
GMCSF對EC細胞周期的影響
運用流式細胞儀檢測細胞周期,觀察GMCSF對EC細胞周期的影響。結果顯示GMCSF使細胞進入S期的比例為9.3%,與對照組2.1%相比有明顯差別。此結果說明GMCSF能夠促使細胞進入S期,加快細胞的分裂,從而促進了細胞的增殖(圖5)。Figure5.EffectofGMCSFoncellcycleofendothelialcells.A:grouptreatedbyGMCSF.B:controlgroup.
體外擴增傳代對內皮細胞增殖的影響
圖6為小鼠骨髓第1代和第4代內皮細胞的生長曲線。利用計算公式[DT=t×1g2/(1gN-1gN0)]計算出第1、4代細胞生長的倍增時間分別為30.25±0.55小時、31.67±0.26小時。第1代與第4代的細胞倍增時間相比,無明顯差異,表明經體外擴增傳代4次,仍能保持傳代早期的增殖潛能。
Figure6.Growthcurveofthefirstandfourthpassagegenerationsofmurineboneendothelialcells.討論
國內外對于骨髓內皮細胞的純化報道較少,但已經進行了一些關于細胞因子對內皮細胞增殖影響的研究,如Yonekura等[8]報道VEGF可以促進內皮細胞的增殖,Rieck等[9]則報道bFGF可促進角膜內皮細胞的生長。我們此前曾報道了VEGF、bFGF、SCF、IL6、GMCSF等對內皮細胞株的增殖有促進作用[10]。GMCSF對未經轉化的骨髓內皮細胞增殖的作用尚未見報道。本研究中,我們用本室配制的培養基在較短的時間內純化了小鼠的骨髓內皮細胞,vWF為陽性,并在此基礎上觀察了GMCSF對骨髓內皮細胞增殖的影響。應用基本培養基培養內皮細胞集落時,形成的集落數較少,加入rmGMCSF后,集落生成明顯增多。MTT的結果亦支持GMCSF對小鼠骨髓內皮細胞生長的刺激作用。細胞生長曲線的結果表明,在含GMCSF培養的條件下,內皮細胞生長的倍增時間為30.25±0.55小時,經4次傳代后細胞倍增時間無明顯延長,表明體外培養擴增4代后,細胞仍能保持早期的增殖能力,GMCSF對骨髓內皮細胞的體外增殖有明顯刺激作用。文獻報道內皮細胞表面有GMCSFR的存在,而內皮細胞本身也可以分泌GMCSF[11]。結合細胞周期測定的結果,可以認為,GMCSF促內皮細胞增殖的機制可能是GMCSF與GMCSFR結合,通過細胞內信號傳遞使更多的細胞進入S期來實現的。
【參考文獻】
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9RieckP,OliverL,EngelmannK,etal.Theroleofexogenous/endogenousbasicfibroblastgrowthfactor(FGF2)andtransforminggrowthfactorsbeta(TGFbeta1)onhumancornealendothelialcellsproliferationinvitro.ExpCellRes,1995;220:36-46
【關鍵詞】人乳鐵蛋白;癌細胞;細胞增殖
人乳鐵蛋白(HumanLactoferrin,hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白,乳汁別是初乳中含量最高,具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用。國外有學者將其應用于腫瘤患者的治療,但是對其作用機制的研究較少。目前國內較少有關于hLF作用于細胞的報道,我們選用易早期轉移的鼻咽癌(NPC)細胞作為研究對象,以中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、人肝臟細胞(L02)作為正常細胞對照,觀察hLF在體外是否具有抑制癌細胞生長的作用,探討hLF抗腫瘤的作用機制,從而為腫瘤的治療提供研究基礎,為臨床實驗及應用提供新的理論依據。
一、材料與方法
1.1材料人鼻咽癌細胞(CNE)、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、人肝臟細胞(L02)均購自中國科學院上海細胞資源中心。重組hLF(Lot:L0520,溶于PBS中,儲存濃度5mg/ml,-20℃儲存備用)和噻唑藍(MTT,Lot:M2128)均購自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清購自HyClone公司。其他試劑均為分析純。
1.2實驗方法
1.2.1細胞培養各細胞系均應用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素的RPMI1640培養基,5%CO2,37℃培養。
1.2.2MTT法檢測細胞增殖設空白對照組和hLF干預組。待細胞生長至對數生長期,接種于96孔細胞培養板,接種數為5×104/孔。每組細胞設5個平行孔,各組細胞分別加入不同濃度的hLF(0,1.25×10-3,2.5×10-3,5×10-3,10×10-3,20×10-3,40×10-3g/L),每孔均為200μl。作用24h后,加入MTT(5g/L,每孔20μl),繼續培養4h,測定A570nm吸光度。
1.2.3細胞形態觀察細胞經hLF處理后,傾去上層懸浮死細胞并用PBS洗兩遍,加入新鮮培養基。同樣處理對照孔細胞,將細胞置于倒置顯微鏡下,觀察細胞形態的變化。
1.3統計學處理數據用x±s表示,組間比較用方差分析。
二、結果
2.1重組hLF對鼻咽癌細胞CNE、人肝臟細胞L02、中國倉鼠細胞CHO系的增殖能力的影響對CNE呈現劑量依賴性的抑制作用,而對正常細胞無抑制作用。人乳鐵蛋白對各細胞體外增殖的影響與空白對照比較:1)P<0.05
2.2細胞形態學觀察顯微鏡鏡下可見,空白對照組癌細胞密集成片生長,如鋪路卵石狀,細胞膜圓潤,透明,顆粒較少,細胞間界限清楚,并可隱約見到細胞核。hLF處理組癌細胞形態發生明顯的改變,隨hLF濃度增加,細胞從正常的增殖旺盛的貼壁生長,逐漸表現為生長緩慢,黏附力降低,細胞變圓,細胞胞質粗糙,細胞內顆粒逐漸增多,且透明度降低,立體感較差,細胞形態完整性受損,而正常細胞在細胞鏡檢圖hLF作用下無顯著變化。
三、討論
hLF多種生物學功能通過免疫系統的激活與調節得以實現。Bezaul研究發現,乳鐵蛋白能抑制鼠實體瘤的生長和轉移。腫瘤內注射LF,可以明顯的減小實體瘤的體積,且作用效果與LF干預天數相關。研究發現,乳鐵蛋白的抗頭頸部腫瘤作用是通過抑制腫瘤細胞增殖實現的。Wolf等發現,人乳鐵蛋白通過阻斷頭頸部腫瘤細胞由G0到G1期的轉化來抑制腫瘤細胞的增殖。人乳鐵蛋白對鼠的SCC細胞系生長的抑制作用,與劑量成正相關;而且人乳鐵蛋白抑制頭頸部細胞癌的作用是通過直接的細胞毒作用及系統性的免疫調節作用實現的。
Varadhachary等人做了大量的口服臨床試驗,證實乳鐵蛋白無藥物相關的有害作用。鼻咽癌作為頭頸部腫瘤之一,其惡性程度較高,早期即可出現頸部淋巴結轉移,臨床上有轉移至骨盆、肺、肝等多器官的病例。選用鼻咽癌細胞作為研究對象,具有一定的代表意義。
本研究結果顯示,人乳鐵蛋白可以抑制鼻咽癌細胞增殖,且呈劑量依賴性,對正常細胞的增殖無明顯抑制作用。這一結果,為開發乳鐵蛋白的抗癌功效提供了理論依據。
【參考文獻】
固定資產折舊額,是固定資產磨損價值貨幣表現,在一定時期內提取折舊的數額,取決于固定資產的規模與固定資產的磨損程度,這是傳統會計核算折舊額時所遵循的原則。但在通貨膨脹、物價上漲過快的條件下,計算折舊時,除了仍應遵循上述基本原則外,還應當考慮通貨膨脹、貨幣貶值的因素,因為只有這樣,才能保證所提折舊基金,能夠從使用價值上恢復原有規模。如1985年投資100萬元,購買每輛載重噸位4噸的10輛載重汽車,壽命期為10年,提取折舊100萬元,1995年這批汽車報廢,由于物價上漲,再用這100萬元折舊額就無法購買具有原使用價值的10輛載重汽車。因此,在新的條件下,折舊額應當要保證固定資產原有使用價值得以補償,這是折舊額應當遵循的原則之一,同時,亦是資產保值應遵守的準則。
二、折舊額的核算方法
(一)固定資產磨損價值貶值的量變規律。
為了正確地核算折舊額,即在通貨膨脹條件下,能抵補貨幣貶值的損失,在固定資產壽命期各個時間階段上所計算的折舊額之和,能夠滿足從使用價值上恢復原有固定資產規模的需要,這首先就需要分析固定資產磨損價值貶值的量變規律。
固定資產是長期使用的物質資料,而生產性的固定資產是物質產品生產過程中的勞動資料。因而,固定資產再生產的過程是:
購置建造一交付使用一報廢一再購置建造。
從上述過程可以看出:建(購)置是固定資產原始價值的始點,報廢是固定資產原始價值的終點。在壽命期中,固定資產每年在提取折舊后,其金額必要產生一個無形貶值量。這個貶值量的變化過程可用公式表示如下:
式中:Z代表固定資產原值;Z’代表貨幣貶值的損失量;Y代表年折舊額;L代表物價上漲率;l,2…n代表時序;n代表固定資產使用年限。
在通貨膨脹條件下,為了避免固定資產貶值的損失,在核算折;日時,應當把貶值(Z’)加到折舊額中,進入產品成本,待產品出售后,收回折舊以滿足更新固定資產的需要。
(二)核算折舊的公式設想。
上面從遞減折舊的觀點,考察固定資產逐年遞減的貶值量的變化規律的,但為了正確計算年折舊額,可以從另外一個角度觀察這個問題,即一方面以整個固定資產原值為基數,隨著時間的推移,由于通貨膨脹,貨幣貶值,可把逐年貶值量加到固定資產原值中去,使固定資產從其生命的始點到生命的終點,仍能保值。另一方面每年提取的折舊額,從第~年末開始,直至折舊終止為止亦逐年加進一個貶值額,并假定固定資產在報廢時無殘值,則可建立如下公式:
把上述方程作為如下整理,則:
整理后簡得:
現仍以本文前面購買10輛汽車為例:
Z=100萬元,n=10年
則該批汽車的年折舊額為:
計算結果,每年提取13.8909萬元,在10年物價總水平上升87.186%的條件下,在10年后仍然能夠購買載重量為4噸的10輛載重汽車。然而按傳統的方法計算折舊,即100萬元10年=10萬元,在通貨膨脹條件下,所計算的折舊總額,是無法按照原有固定資產使用價值規模更新全部固定資產,即無法保證固定資產保值的。
三、核算折舊額的幾個具體問題
通過實例證明,筆者認為上面所設計并經過推導,論證所建立的在通貨膨脹條件下,計算折舊額的公式是科學的,但在應用公式時,仍有下列問題需做進一步的研究。
(一)價格指數的選擇。
通貨膨脹,物價上漲,這是一個普遍的問題。但在現實經濟生活中,由于各種商品在國計民生中的作用不同,因而其物價上漲幅度是不相同的。因此,在我國實際工作中編制有各種性質的價格指數。那么在計算固定資產折舊額時,應當采用哪種價格指數為宜呢?筆者認為,應當采用國家統計局編制的固定資產投資價格指數。這一指數綜合反映我國固定資產投資價格的變動程度,而且與折舊額的聯系最為密切。
(二)固定資產貶值率總額。
固定資產折舊的計算是一個十分重要經濟問題,它關系到正確評價企業經濟效益與國家財政收入等問題。因此國家財政部門應當根據固定資產投資價格總指數與分類指數,考慮到未來一段時期內經濟發展的趨勢,對價格變動作出預測,并以定額參數的形式公布,供各企業計算折舊時采用。當然我們不否認制定定額參數即貨幣貶值的定額參數是十分復雜的工作。但為了保證這項工作的準確性與科學性,可以在預測的基礎上經有關專家討論,爾后經有關權威機構批準,再行公布采用。
(三)定額貶值率與實際貶值率的問題。
貨幣定額貶值率與實際貶值率是要發生離差的,因此,根據定額貨幣貶值率計算的折舊額和實際貨幣貶值率計算的數值之間,必須要產生一個差數,為此需要調整。一般來講,在年度執行過程中,可按貨幣定額貶值率計算,待年終決算時,再根據實際貨幣貶值率進行調整,其公式如下:
YI=Y[l+(L1-L)]
式中:YI代表調整后的折舊額;Y代表按貨幣定額或預計貶值率折舊額;LI代表實際貨幣貶值率;L代表定額貨幣貶值率。
設Y=13.8909萬元;L1=0.07;L=0.0647
患兒11例,平均年齡2-4歲,11例患兒的臨床表現依次為:淋巴結腫大(76%,19/25),肝脾腫大(72%,18/25),皮疹(60%,15/25),骨質浸潤(52%,13/25),貧血(52%,13/25),發熱(52%,13/25),肺部浸潤(44%,11/25)。實驗室檢查血象、骨髓像、肺部x線缺乏特異性表現;骨骼X線病變以溶骨性骨質破壞多見;頭顱CT/MRI為診斷顱底骨質破壞和蝶鞍病變的重要方法。患兒確診為朗細胞組織細胞增生癥。
治療
本病屬于免疫系統疾病,治療該病癥必須增強免疫力,可以注射"免疫抑制劑"治療。
2護理
護理計劃及早制定?;純核家环N罕見的疾病,盡快確診,積極配合醫生迅速和有效地使所有援助檢查,皮膚科,兒科和其他科室會診。對這種嚴重的疾病評估,獲取相關信息,并與醫生的治療方案,孩子們組織討論,制定了詳細的護理計劃,認真落實和不斷改進的條件,并根據合理的謹慎措施轉變。
2.1發燒護理 密切觀察體溫變化,每天6次測量體溫恢復正常后3天,每天一次衡量,臥床休息,補充營養和液體的溫度后,及時更換汗濕衣服,以防止滴濕疹的發生。
2.2心理護理 兒童有康復的強烈愿望,通過耐心說服,消除恐懼的治療,治療可以有意識地給予精神上安慰。為家長密切合作進行治療。
2.3 高蛋白飲食和營養,高維生素,好食物和合理的原則,以改善機體健康。增加人體的耐受化療,提高免疫力。特殊治療時,如嘔吐,嚴重且難以考慮飲食或靜脈高營養消耗的元素,以確保病人有足夠的熱量,改善營養狀況。
2.4病人的病情在手術前仔細觀察,觀察腹部疼痛,位置,范圍,腹脹情況排氣排便情況的性質,使快速,皮膚準備,術前皮膚測試等,禁用止痛藥,以防掩蓋病情。
2.5 患者手術后回到病房,以枕平臥4?6小時,頭側面,保持呼吸通暢,必要時給予吸氧。麻醉前作出明確,監測有無嘔吐,腹脹,排氣排便情況,保持引流通暢胃腸減壓生命體征及腹部癥狀密切觀察,并觀察引流液,顏色和數量的性質;禁止在食品,良好的口腔護理,根據醫生的意見合理補充水分和電解質溶液;術后早期的半臥位,鼓勵早期活動,防止腸粘連,這將有利于身體恢復;蠕動恢復。適當的飲食應少量多餐,逐漸結束,并觀察是否進食后腹痛,腹脹,嘔吐等癥狀,如果上述癥狀,應暫停進食,看看是否有腸梗阻,吻合口狹窄等并發癥;該觀察傷口無出血,滲液,腫脹,保持傷口敷料清潔干燥,防止尿液污染傷口。
2.6藥物不良反應及護理 對化療藥物的胃腸道不良反應的各種觀測是普遍的。在化療前或口服止吐藥物化療期間的飲食,以減少惡心和嘔吐,靜脈注射30分鐘要輕和消化。做三查七對的。(1)長春新堿導致末梢神經炎,皮膚,肌肉和關節四肢麻木,疼痛,腹痛,肝,腎功能表現應該是保護,注意血液中的變化,低白血細胞分離應該很好對各種感染的保護;(2)高劑量甲氨蝶呤結合6 - MP的時間。使胃腸道反應,口腔炎,口腔潰瘍惡化。重要的骨髓抑制,國會議員在6個半小時,晚飯后口服,每日一次,以減輕反應,同時加強口腔護理,甲氨蝶呤輸液,可能含有冰或冷水,以減少口腔黏膜和菜,氨濃度的甲氨蝶呤(3)VP16的使用,應密切觀察有無泄漏,一旦發現,應立即停止輸液,以避免組織壞死和(或)血酸靜脈炎。 16輸液的副總裁會引起性低血壓,它會促使孩子說謊,緩慢的速度靜脈滴注。
密切觀察病情變化,為爭取更多的搶救時間。密切觀察生命體征。啟用多功能心電監護儀密切監測呼吸,心率,血氧變化,所以在氧氣下降,及時救護。關閉的體溫,體溫過高,及時物理降溫,低溫,溫暖的加強,觀察使溫度維持在正常范圍內,四肢溫暖。遵守一般條件。皮膚兒童,所有的重要器官損傷,嚴重的疾病,快速,并密切觀察皮膚出血,皰疹比以前或加重更好;肝臟是放大或縮小趨勢;觀察的臉部,嘴唇,身體膚色,反應和尿色;觀察胃腸道出血:留置胃管,觀察出血,患兒棕色胃胃內容物后退出了0.6個百分點后,蘇打水洗胃凝血酶鼻飼的效果,但病情反復。由于消化道出血,偶爾空腹的患兒,有低血糖的風險,血糖監測跟蹤,使低血糖的及時修正。血液生化檢驗顯示低血清鈣,補鈣時間,以防止鈣抽搐。皮膚,粘膜的護理。與身體皮膚,頭發,手,有出血,紫癜蓋腳,兒童大量散在皰疹,皰疹損壞個人,每天1:15000高錳酸鉀溶液擦洗,動作輕柔,穿著柔軟的衣服,以免加重皮膚病變,破損的皮膚涂上百多邦??谇挥脽o菌生理鹽水進行常規口腔護理,以減少感染?;純涸陝訒r易擦傷足跟部,用無菌紗布加以包扎。加強臀部護理,大小便后及時更換吸濕性好、柔軟的尿褲,保持全身皮膚清潔干燥。適時翻身,以免局部長期受壓。
經過全面、細致的一輪復習后,學生已基本掌握了教材知識,作為二輪復習的重點則應切實加強對新課程標準和2012年考試說明的研究,以此制定復習目標,這樣復習才有針對性和實效性。如:2012年考試說明中對細胞增殖內容的要求。
從近幾年的高考來看,命題重點圍繞細胞周期中染色體行為和數目變化規律,減數分裂與有絲分裂的比較及圖像識別,減數分裂的過程及與遺傳的關系。那么學生在這塊內容中到底還有哪些未落實到位?又該如何幫助學生有效解決這些問題?
一、典型錯誤分析
【典例】圖為雄果蠅體內某細胞分裂過程中,每條染色體上DNA含量變化(甲曲線)和染色體數目變化(乙曲線)。請據圖回答:
(1) CD段細胞中有( )條染色體,DE段有染色單體( )條,FG段細胞中有DNA( )個,DE段可形成四分體( )個。
(2)在A點若用3H標記該細胞的DNA雙鏈,再將其轉入不含3H的培養基中
培養,在FG段一個細胞中的染色體總數和被3H標記的染色體數分別為( ) ( )。
(3)若該細胞基因型為AaXbY,在分裂完成后產生了一個AYY的,則另三個的基因型分別為( )( )( )。
(4)該細胞某一條染色體的兩條單體相同位點出現不同基因的變化可發生在( )段。
該題考查目標:有絲分裂與減數分裂的曲線辨析,減數分裂中染色體、DNA、單體的數目變化規律,染色體、DNA、脫氧核苷酸鏈之間的關系,及減數分裂與生物變異的聯系。通過學案反映出學生存在以下幾方面的問題:
1.基礎知識不扎實,記憶不牢,知識點混淆。例如:在第(1)小題中學生由于把果蠅染色體數4對記成了4條從而造成CD段錯寫為含4條染色體。由于不明確四分體的概
(3)糾錯補偏,反思內化。有一句教育的真理“世界上最有價值的習題不是專家出的習題,而是自己做錯的習題”。二輪復習抓錯題相當機的導航燈一樣,它可以幫我們指明前進的方向。學生在一輪復習中已做了大量試題,經歷了多次模擬考試,難免出現許多錯誤,若能指導學生將這些錯誤進行分類整理,就會發現反復出錯的地方就是自己知識上的薄弱環節,這時就可針對性地翻閱書本,結合書本來解決知識漏洞,當然有些錯誤可能是學生不注意使用生物科學術語回答,畫圖表、寫實驗設計不規范嚴謹等造成的,通過糾錯也可有效提醒學生對自己這方面問題的關注。
二輪復習不做題不行,但沉迷于題海也不行,關鍵要提高做題質量??偨Y歸納常見題型的解題規律、方法技巧,從而達到弄懂一道題,旁通一類題的目的。也可通過演練近幾年的高考真題親身感觸高考題的命題思路、設問方式,從中感悟解題技巧。
3.消除情感夢魘,增強自信。 美國著名心理學家Robert Rosenthal曾做過這樣一個實驗:他從某個班級的花名冊中隨意挑選了幾個名字,并且告訴老師這些學生經過測試智商較高。之后,老師便關注并鼓勵他們,這些學生也由于有了自信而努力學習。八個月之后,那些“高智商”的學生的成績竟有了驚人的進步。這個實驗證實了自信的重要性。那么如何增強學生對考試的自信,以實現從容應考呢?
(1)充分的考前準備:多數學生都有這樣的體會:“一看到考題不難,緊張不安的情緒便會隨之減少,腦子不再麻木,思維也變得靈活了?!币虼?,考前一定要做好知識與技能雙重準備,并針對考試中可能出現的復雜情況,進行有目的的訓練,做到胸有成竹,考試當然也充滿信心。
(2)適當的心理調節:既要正確對待壓力,但也不能給自己增加壓力。不過多去想考試成敗將會給自己帶來什么后果,尤其不夸大考試成敗的影響,樹立“天生我材必有用”的廣闊意境。
【摘要】文章對生產制造企業價值鏈及價值鏈分析理論進行總結,指出價值鏈分析在制造企業內部物流成本管理中的運用有極強的優越性。
【關鍵詞】價值鏈分析;制造企業;內部物流成本管理;運用
物流成本作為企業“第三利潤源泉”,倍受各方的關注。物流成本管理的意義在于:通過對物流成本的有效把握,利用物流要素之間效益背反關系,科學、合理地組織物流活動,加強對物流活動過程中費用支出的有效控制,降低物流活動中的物化勞動和活勞動的消耗,從而達到降低物流總成本,提高企業和社會經濟效益的目的。
目前,造成中國物流成本居高不下的關鍵因素是制造業,困擾商品流程優化的還是制造業。為了提高制造業的競爭力,要求從業人員能夠對原材料、半成品、產成品以及相關的信息流動做到7R,即正確的產品、正確的質量、正確的條件、正確的顧客、正確的地方、正確的時間、正確的成本。這也正是現代物流管理的實質。制造企業的物流成本管理中引入價值鏈理論,能對企業內部物流作業流程進行持續改善,以消除不必要的作業;通過對物流成本進行評價,分析確立物流成本控制環節,有利于幫助企業降低物流作業成本。
一、價值鏈及價值鏈分析方法
信息技術的廣泛應用,使企業從價格競爭、產品競爭和個體競爭轉向價值競爭、服務競爭和網絡競爭,而持續的核心競爭優勢對于企業后一種情況的競爭具有更加重要的戰略意義。價值鏈作為確定企業核心競爭優勢的一種基本工具應運而生。它是一種系統性研究企業競爭優勢的方法,其核心內容是分解企業價值鏈、確定價值活動成本,以價值最大化為目標重構價值鏈,建立其優化結構,從而提升企業的核心競爭優勢。價值鏈的優化研究經歷了從邁克爾·波特的傳統價值鏈、Peter·Hines的“集成物料價值的運輸線”、JefferyF1Rayport和JohnJ1Sviokla的虛擬價值鏈,再到價值網理論的一個長期過程。
價值鏈已經發展成為當代網絡經濟環境下的一種組織戰略思想和模式,它是以企業儲運、生產、銷售、服務等業務流程為載體,以實現顧客價值最大化為直接目標而形成的企業內部價值活動的系統性結構,為企業形成信心競爭優勢、創造長期利潤提供了一種系統的、動態的分析方法。
(一)生產制造企業的價值鏈
現代企業管理思想認為企業是一個為最終滿足顧客需要而設計的一系列作業的集合體,企業本身就是一個由此及彼、由內到外的作業鏈,每完成一項作業要消耗一定的資源,而作業的產生又形成一定的價值,轉移到下一個作業,依此轉移,直至形成最終產品,提供給企業外部顧客。而最終產品作為企業內部作業鏈的最后一環,凝結了各個作業鏈所形成并最終提供給顧客的價值。因此,作業鏈同時又表現為價值鏈,作業耗費與作業產出配比的結果,就是企業的盈利。價值鏈由多個作業組成,價值鏈內信息的傳遞基本上具有雙向特征。根據價值鏈各個環節的特征,價值鏈可分為外部價值鏈和內部價值鏈。外部價值鏈包括企業、供應商、客戶等;內部價值鏈主要包括生產活動的作業活動等。
(二)內部價值鏈分析
低成本是企業取得任何競爭優勢的有利保障。企業應在營造企業核心競爭力的前提下,對內部價值鏈進行分析,主要是為了解決降低企業內部成本問題。而這些分析工作都是以“作業”為中心,在整個過程中還須結合事前管理的統籌規劃、事中管理的實時控制和事后管理的分析考評,以確認企業的價值活動有哪些,處于什么樣的分布狀態,并將每個價值活動所耗費的成本與對產品價值的貢獻相比較,根據企業各個作業活動在價值增值中的不同作用,將其進行細分并采取措施加以改進。
內部價值鏈分析是將從基本的原材料到企業最終用戶之間的價值鏈分解成作業活動,以便理解成本的性質和差異產生的原因,通過差別分析和成本分析,找出企業在價值生產過程中的利弊。企業為了實現其“股東價值最大化”的經營目標,必須提高其作業產出,減少作業耗費,但并非所有的作業都能夠創造價值,這就需要溯本求源,分析哪些作業能夠增加價值,哪些作業不能增加價值,并盡可能消除不能創造價值的作業,即使能創造價值的作業,也應盡可能減少其作業耗費,這一切都要借助于作業分析。為此,作業管理(Activity-basedManagement簡稱ABM)作為一種現代企業管理方法由此產生,作業分析主要過程如下:
1.確定作業。確定企業的價值生產過程,根據作業對競爭優勢的貢獻大小區分作業,從而確定產品或服務的總成本構成。
2.評估作業。識別各過程的中間環節,從而確定獲得相關成本優勢的機遇。每項物流作業之間不是完全獨立的,在同一條價值鏈上是相互依賴的。例如,企業產品制造的實現必須依賴于原材料的儲備以及運輸,而這種相互之間的依賴性有時也會造成一些不必要的重復操作,從而影響整體的效率以及效益。因此,通過價值鏈分析法辨別出冗余環節,按各個作業活動在價值增值中的作用不同,將其細分為直接增值作業活動、輔助增值作業活動、非增值作業活動和逆增值作業活動,從而確定價值創造過程中的核心環節。
3.優化作業。通過對作業活動的評估,擬定改進方案。對于直接增值作業活動,應在保持其增值效果不降低的前提下,盡可能提高運行效率,減少資源耗費和占用;對于輔助增值作業活動,有必要在維持其輔助作用不變的情況下,盡可能減少資源占用;對于非增值作業活動和逆增值作業活動,則應盡可能減少和避免,達到優化作業的目的。
同時,管理深入到作業水平,進行作業分析,就要求變革傳統的成本計算,使其與之相適應,即要求成本計算深入到每一作業,進行作業成本計算。由此,基于企業價值鏈的作業成本法應運而生。
二、價值鏈分析在制造企業內部物流成本管理中的運用
對于生產制造型企業來講,生產制造賦予了最終商品的大部分價值,是企業的核心業務單元。另外,現代的制造型企業在不斷加大生產力度的同時也十分注重客戶的售后服務,不斷加大其在產品價值增值過程中的作用,從而逐漸地形成企業的核心競爭力。
企業的物流過程從價值鏈角度分析,不但有利于節省自身的業務運作時間、合理利用資源,而且有利于為最終的顧客提供最有價值的服務,在企業的物流鏈上找到價值增值過程中貢獻最大的核心環節。同時,利用價值鏈分析法企業的物流活動也不再簡單地以全面削減成本為目的,而是在各價值生產過程中降低成本、提高效率。
制造業企業內部物流主要包括:供應物流,即上游企業對本企業所需物資供應的物流活動;原材料、零配件部件物流,即企業內部所需要原材料、零配件部件從供應倉庫或者上游企業直接供應到生產線的物流活動;半成品物流,即生產過程中的半成品從上一道工序(或車間)到下一道工序(或車間)的物流活動;產成品物流,即生產出的成品或最終產品,從生產線到產成品倉庫或者直接到下游企業的物流活動;回收物流,即生產過程中的廢棄物丟棄或再生所發生的物流活動。
內部物流的合理化可以促進生產過程中資源配置的合理化和工藝流程的合理化,從而大大提高制造業企業的競爭力。目前,許多企業已經開始意識到內部物流管理對于降低成本、提高物流效益,改善企業管理的重要作用,紛紛優化企業內部物流管理,建立內部物流部門,對訂單、庫存、運輸、倉儲、加工等物流各環節或全過程實施高效的管理計劃和控制,促進企業可持續發展,增強企業核心競爭力。
但現有企業內部的物流管理存在著許多軟肋與制約:
一是傳統的管理理念、機制、方式等影響企業內部物流效率的提高。轉二是企業內部物流環節縱、橫向聯合薄弱。
三是物流成本核算缺乏財務標準,責任主體不清,物流管理效益難以凸現。
四是對現代物流的研究較滯后,缺乏專業人才,實際操作經驗少等。
三、基于價值鏈分析方法的優越性
基于價值鏈分析的成本觀是成本管理從價值保證和價值增加兩個視角來進行的。由此,價值鏈成本管理實際上也就具有了雙重的性質:一是控制資源的必要而足夠的投入,從而保證顧客價值(表現為保證提供合格產品);二是控制資源的耗費,以提供盡可能多的顧客價值(表現在保證質量前提下的較低價格)。
通過價值鏈分析,對外能識別并確保企業在行業或產業中的優勢地位和核心地位,從而能夠在整體價值鏈顧客價值最大化的前提下,通過價值讓渡等方式結成戰略聯盟而形成優勢價值鏈聯盟,以使企業確保自身的優勢戰略定位;對內運用價值鏈分析法來考察企業各項活動及其相互關系,能夠盡可能消除不增加價值的作業,降低可增加價值作業的資源消耗,能更全面地分析企業成本的構成,從而避免使用傳統成本管理方法的缺陷。
因此,基于價值鏈的成本管理具有以下優勢:
(一)充分考慮了降低成本的相對性問題
成本的降低有絕對成本降低和相對成本降低之分。絕對成本降低是通過一定的途徑使成本的發生額低于一定的水平(標準或預算);相對成本降低是將成本與作業的質量、效率以至最終與企業效益聯系起來,它并不單純追求成本絕對額的降低,而是追求成本效益的不斷提高。
(二)抓住了成本管理的關鍵即作業問題
基于價值鏈的成本管理從研究導致成本發生的作業及作業結構開始,通過對作業及作業結構的優化、改造來達到提高成本效益的目的,因而這種成本管理抓住了成本問題的關鍵。
(三)擴大了傳統成本管理的控制范圍
基于價值鏈的成本管理在研究成本問題時不僅要考察生產作業,還要考察非生產作業;不僅考察基本作業,還要考察輔助作業;不僅要考察本企業的價值鏈,而且要考察競爭對手、供應商、銷售渠道、顧客甚至整個行業的價值鏈,以尋求廣泛提高本企業成本效益的途徑。
(四)更為全面地考慮了成本管理中的相關問題
基于價值鏈的成本管理追求的是整個價值鏈效益的優化,這就要求成本管理須正確處理作業與作業之間,業務流程與業務流程之間,本企業價值鏈與供應商、銷售渠道之間的關系;要求通過優化這些關系來提高整個價值鏈的效益,而不能為獲得局部利益損害整體利益,也不能為了短期利益而損害長期利益。
【參考文獻】
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