時間：2023-03-16 16:30:31
序論：在您撰寫園藝技術畢業論文時，參考他人的優秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發您的創作熱情，引導您走向新的創作高度。
關鍵詞： 民辦院校藝術設計類本科生 畢業論文 指導方法
畢業論文與畢業設計是每個藝術設計類畢業生的必經之路，也是他們這四年來設計學習生涯的一個總結。對于民辦院校藝術設計類本科生這一特殊群體來說，論文與設計往往使他們絞盡腦汁，煩惱不已。那么，藝術設計系的教師如何指引他們交上滿意的答卷，為四年的學習畫上一個完美的句號呢？我結合實踐教學經驗作出探索，旨在找出適合民辦院校藝術設計類本科生的論文指導方法。
一、民辦院校藝術設計類畢業論文現狀及存在的問題
針對民辦綜合性院校藝術設計專業的特殊性，通過實際教學指導實踐，我總結出了民辦綜合性院校藝術設計類的畢業生在論文方面存在著以下種種問題。
1.有一小部分學生重設計而輕論文。
這與許多學生頭腦中存在著重設計輕論文的觀念有關，平時忽視基礎理論知識的學習，認為論文無關緊要，只要設計能過就行了，有的甚至認為自己是設計師，不屑于將自己的設計理念、構思過程用文字表達出來，認為藝術是只可意會不可言傳的。有的學生不按規定的時間完成初稿，對指導老師的修改意見不予以理會，從而使畢業論文的質量不高。
2.大部分學生文化底子弱、寫作功底差。
大部分藝術設計類畢業生對于論文有心無力。藝術設計專業學生在高考中屬于藝術類考生，總體文化考分普遍偏低，而入學后，大部分時間都側重專業技能學習，對《藝術概論》、《中外設計史》等專業文化課程普遍學習熱情不高。這樣的學習態度導致畢業論文寫作理論功底較差。如有一學生論文題為《淺談中外卡通發展史》的論文，首先這個選題就有假、大、空的潛在問題，中外卡通發展史本身已經是一門歷史，歷史是已經發生過的事實，這些事實是一些真實性的記錄，而不是談出來的，這是假。而大呢，中外，包括中國和國外，而國外包括各個大陸上的國家，卡通包括卡通人物、場景、劇本等，題目選題范圍太大，自然就難以寫得詳細，從而產生了空的問題。
大部分學生寫作基本功底差，語言表達不清晰，結果論文顛三倒四、牛頭不對馬嘴，連自己都看不明白。對自己所要論述的觀點不能從幾個方面分清條理來論述，也分不清主次。如談“古代龍鳳紋在現代包裝設計中的運用”，重點應在“運用”上做文章，但學生卻用大半篇幅來解釋什么是“龍鳳紋”、“龍鳳紋的由來和歷史”，等等，而對龍鳳紋究竟如何在現代包裝設計中“運用”卻聊聊數字，草草結束，還沒說到重點就沒有下文了。
二、民辦院校藝術設計類論文指導探索
針對民辦綜合性院校藝術設計專業的特殊性，通過實際教學指導實踐，我進行了一系列的教學改革和探索，總結出以下幾點。
1.端正學生的寫作態度，提高對畢業論文重要性的認識。
這一點對藝術設計類畢業生來說尤其重要。應該在平時的教學工作中端正學生對畢業論文無所謂這一錯誤認識，讓他們了解到畢業論文質量如何會影響整個畢業設計過程。
2.加強寫作訓練。
可以結合專業課學習，進行針對性的小論文，重點在于尋找相關資料和建立個人論點，對論文字數和規范性要求不高，但應符合論文的基本格式。以包裝設計課程為例，學生獨立確定主題、選擇材料、制作1―2套包裝成品；以論文形式完成相應的課程報告。具體報告可能包括“設計背景、設計構想、設計形式、材料應用、后期問題、市場定位等”。通過應用和分析促進學生對設計基本知識的綜合理解，能夠用更理性和研究性的方式對待設計，對于學生獨立參加各種比賽、畢業實習和畢業設計的順利完成相當有益。另外，文獻檢索對于培養學生的自學能力和查找學術資料非常重要，因而在二三年級階段有必要開設文獻檢索課程。
3.實行理論與實踐現結合的模式。
為了提高畢業論文質量，讓論文內容更充實，同時也是為了提高畢業生綜合能力和畢業設計的質量，應當實行理論結合實踐的操作模式，即學生在完成畢業設計的同時，還要完成與設計緊密結合、息息相關的畢業論文的寫作。這種模式要求學生在論文中大篇幅是對自己設計的一個闡述，相當于一個完整版的設計說明。這個設計說明字數要求在3000字以上，其他格式及具體要求與普通本科論文要求相同。這種模式通過對作品的創作過程、構思和材料等方面進行闡述，形成論文，由于都是自身親身經歷過的事情，因此說明詳盡、到位，能夠很好地闡釋設計思想，不僅可以彌補畢業論文無話可說，畢業設計說不出口的缺陷，而且可以有效地避免抄襲現象，提高畢業生論文與設計質量。
4.加強指導環節。
在論文的寫作過程中，老師的指導十分重要，只有在論文寫作的各個階段及時給予學生針對性的指導，學生在寫作時才能避免走彎路。如：選題時要指導學生選擇自己感興趣的題目，要大小合適，便于操作；修改文章時主要從調整結構、充實內容、修改文字等方面進行。
總之，民辦綜合性院校的藝術設計專業有其特殊性，也正是因為這種特殊性，作為藝術設計系的教師，我們應當因材施教，針對其特殊性制訂特殊的指導方法。畢業論文與創作的指導不是一成不變、完全一致的，每個高校需要不斷地改革、嘗試、總結，找到一條適合自己的操作管理模式。
參考文獻：
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［2］田蓉輝.藝術設計專業畢業論文寫作教學的思考［J］.大眾文藝，2010，（08）.
高職院校藝術類專業畢業設計可以培養學生分析問題、解決問題的能力，強化其使用設計軟件，熟悉設計與制作的一般流程，使之初步具備與客戶溝通和協調的能力，提高學生的職業技能。當前，畢業設計選題價值較低是高職院校藝術類專業畢業設計存在的一個突出問題。受限于指導教師承接的社會設計項目少、種類單一等因素，目前高職院校藝術類專業的畢業設計難以為畢業生提供合理的“項目庫”，導致多數高職院校藝術類專業學生的畢業設計選題大多是與實際生活脫節的虛擬課題，“真題真做”或“真題實做”少之又少，畢業設計流于形式與表面，難以深入開展。這與高職院校一貫秉持的“以市場為導向，以就業為宗旨”的教學理念相背離。除此之外，在評價方面，高職院校藝術類專業畢業設計也存在很大問題。許多學校的畢業設計評價時僅由專業教師自行承擔，缺乏引入設計公司社會性評價的環節;同時，答辯環節缺乏必要的淘汰，造成考核和評價形式大于內容以及企業和社會參與評價少的問題。
二、基于創業理念下藝術設計類專業畢業設計的教學改革
(一)鼓勵學生自主選題
基于創業理念的畢業設計實施的第一步，就是讓學生自己走向市場，設計選題。畢業設計項目或是來源于學生與同學的交流，或是來自于網絡的項目外包，不論是哪一種，其真實性必須得到保證。以近幾年裝潢藝術設計專業的畢業設計項目而言，大致有視覺識別系統、宣傳冊、房地產公司樓書、包裝設計、企業網頁設計等幾大類。畢業設計的自主選題雖然是帶有學生個人偏好的一次主觀選擇，但項目是基于典型工作任務的真實設計，因此，能夠使學生獲得設計過程的完整訓練。學生的選題大多比較貼近本人的職業期望，能夠訓練學生掌握相關設計職業崗位或崗位群中的基本能力與關鍵能力。導師應在尊重學生自主選擇的前提下，使課題類型多樣化，最大程度地發揮學生各自的潛能。學生在啟動帶有獨立工作性質的選題中，自然也會根據個人的實際能力，選擇深度、廣度和難度適當的項目進行畢業設計。而作為畢業設計實施的管理者，學校專業教研室需要客觀評估學生的選題，比如，判斷學生自主選擇的項目是否具有典型性，其訓練是否具有實效性與可行性等。
(二)讓學生與客戶充分溝通，明確設計任務
學校在強調畢業設計“真題真做”或“真題實做”的前提下，應積極開展虛擬創業。市場上的項目大多是有條件的限定性設計，比如，針對平面設計、廣告設計等選題，學生在進行畢業設計時，必須了解消費對象、產品、媒體特定、制作工藝等要素;針對有關室內設計方面的選題，則必須詳細了解客戶意愿、工程預算、施工組織、施工工藝、施工材料等。藝術設計創業的成功離不開客戶資源，一個設計師只有擁有了一定數量的固定客戶，才能夠被市場認可。有創意的設計并不一定適應于市場的競爭，這其中涉及到設計營銷與管理的重要性。如何讓設計達到預期的市場效應，首先就要對所涉及到的市場進行分析，找到最恰當的目標消費群，進行市場定位，然后確定項目的核心。一切設計行為都圍繞著核心概念展開，這樣才能使設計不偏離客戶的想法。學生在畢業設計的前期，需要深入市場進行調研，積累有關市場信息和工藝方面的資料，在與客戶就設計風格、造價成本、媒介材料等設計問題進行交流時，面對客戶的質疑，應適度堅持自己的意見，不應完全被客戶牽著鼻子走，要用創意引導并說服客戶，使客戶認同自己的設計作品。
(三)制定科學的評價標準
學生畢業設計的成績評定，習見的做法是由指導教師和答辯委員會的評分組成，兩部分的比例各占50%，從本質上來說，這屬于“校內循環”。對于以創業理念為導向的藝術設計類專業畢業設計而言，答辯小組的成績評價可以做弱化處理，而將社會(或客戶)對學生個人設計得失的評價放在重要位置。具體內容包括:設計理念是否合適，功能設計是否符合業主需要，技術措施是否合理，哪些部分還需要改進，界面設計是否悅目，植物種植設計效果是否美觀，家具與陳設選擇是否得當，風格采用是否合適，氛圍營造是否到位，如何平衡個人設計理念與業主決策之間的矛盾，施工效果如何，采用何種材料和施工工藝完成設計等等。在整個設計實施和現場跟蹤的過程中，學生可以采用攝影或工作筆記等方式進行記錄、總結?；趧摌I理念下的畢業設計教學改革，對畢業設計教學與質量管理的整體效能要求更高。同時，通過分析個人與社會需求兩者之間的差距，可以使畢業設計教學實施與評價更加多元開放，實現畢業設計教學系統中目標、實施、反饋、控制子系統的協調統一。
三、結語
姓名： 專業： 所屬系別：
學號 指導教師姓名 職 稱：
開題報告時間： 年 月 日
論 文 題 目 ：小型醫院業務管理系統設計
1、擬選課題國內、外的研究動態、水平、存在問題，與本人實習、社會實踐、調研的關系，并附主要參考文獻：
醫院的醫療水平和服務質量一直是國內外關注的焦點，僅靠增加基礎設施投入和脫離信息化的管理方法的改進，是不能從根本上提高醫院的工作效率、服務質量和管理水平的。醫院業務管理系統的目的就是減輕業務勞動強度，減少了差錯，科學管理藥品，節省人力，提高醫院的財、物管理水平，增加經濟效益，改善患者的就醫環境，方便患者就醫和查詢，提高醫院的服務效率和服務質量，提高醫院的醫療質量和管理水平。所以，一個現代化的適應社會發展需要的醫院，除了具備一流的醫療隊伍、一流的服務設施之外，還應具備一流的業務管理系統。
醫院業務管理系統不僅能提高醫務人員的工作效率和醫療水平，而且能提高醫院的服務質量。因此，醫院對業務管理系統有著強烈的需求。本文介紹了醫院出入院處、病區、藥房、藥庫的業務流程，在整體分析醫院各部門以及部門之間的實際工作業務的基礎之上，結合管理系統開發的理念，用VB 6.0作為前端開發工具，開發了醫院業務管理系統。目的就是利用計算機軟硬件技術、 網絡通訊技術等現代化手段，對醫院及其所屬各部門的業務進行綜合管理。從而為醫院的整體運行提供全面的、自動化服務的業務信息系統。全文通過對業務流程的分析以及對系統的模塊設計、實體-聯系圖(E-R圖)設計、關系模式設計、數據庫設計、代碼設計、人機界面設計等，詳細地闡明了本系統開發的目的、過程及預期效果。
業務管理系統是一門集管理科學、信息科學、系統科學及計算機科學為一體的綜合性學科，研究的是管理活動的全過程，以便有效的管理醫院。
參考文獻
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[3] 張海藩.軟件工程導論（第四版）.北京：清華大學出版社,2003
[4] 催五子、于寧。界面設計與Visual Bbasic.北京：清華大學出版社,2004
2、課題擬解決的主要問題，在理論和應用方面的意義，完成課題的條件（包括實習單位情況）和設計（論文）的主要內容：
意義：1、為病人提供更好更快、更快的服務，提高醫院在醫療市場的競爭力以及吸引更多的病人到本醫院就醫；
2、人力工資昂貴，迫使醫院采用計算機以提高勞動效率；
功能：1、門診掛號：為病人提供就醫卡方便病人；
2、住院病人管理系統：是醫院可以隨時了解病人情況；
3、藥房管理系統：提高了藥品管理的質量，和工作效率；
4、門診醫生工作站、住院費用的管理、病歷管理系統、以及外部接口等。
3、指導教師對學生選題報告的評語：
指導教師簽字： 年 月 日
4、選題報告會評議組意見：
組長（簽字）： 年 月 日
5、學院審查意見：
關鍵詞：畢業論文；質量；問題；提高
中圖分類號：G642.0 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2013）34-0176-02
畢業論文（設計）是本科教育中最重要的實踐性教學，作為培養方案的最后一個環節，它既是對學生大學四年學習的全方位檢驗與考核，也是培養學生分析解決問題和獨立工作能力的綜合平臺。因此，這個環節的實施可為學生走向工作崗位或進入研究生階段學習奠定基礎。但目前本科生畢業設計工作中存在著一些問題，影響了畢業設計綜合教育功能的發揮。本文在分析園藝專業本科畢業設計中存在的主要問題及其形成原因的基礎上，根據園藝專業的特點，提出了一些提高畢業論文質量的建議。
一、畢業論文中主要存在的質量問題
對當前有關理論前沿或實際生產中的熱點、焦點問題關注不夠，缺乏創新意識和創新思維，沒有獨到見解，低水平重復較多。論文對問題的分析不夠深刻，缺乏一定學術價值，針對性不強。畢業論文缺少歷史性回顧和綜述，對本領域了解深度不夠，導致盲目推理，盡管有些選題來源于生產實踐，但在畢業論文未能作系統設計，也未進行針對性實驗，未形成自己的觀點。
1.缺乏一定的學術價值，應用價值較少。有學者認為，27%的畢業論文選題來自實踐，但只是單純地堆放基本理論和數據，分析和解決問題的思路狹窄，綜合運用知識能力較差；34%的畢業論文缺少歷史性回顧和綜述，對本領域了解深度不夠，導致在文章中盲目推理，選題雖來源于生產實踐，但未進行針對性實驗，難以形成自己的觀點。調查顯示，本科畢業論文中大量引用和編輯別人的觀點，缺乏學生獨立的見解：有61.3%學生的畢業論文是對別人的文章進行裁剪并融入自己的觀點，有7.9%學生的畢業論文完全是通過計算機裁剪重組形成的，只有30.8%學生的畢業論文是在實地調研基礎上撰寫的，闡述的是自己的觀點。在這些學生的畢業論文中，有些觀點是通過學生一定的積累所形成，也有一些是在實地調查研究的基礎上形成的，但其它69.2%的學生的畢業論文觀點只能是別人研究的堆砌，或者是完全抄襲別人的觀點，這些論文只是原有觀點的簡單重復，它們的學術價值和實用價值就可想而知。
2.畢業論文撰寫不規范。在以往關于畢業論文質量的探討中偏重于設計選題和課題實施方案的制定與實施，而對論文的撰寫過程重視不足，有一些畢業學生在論文答辯時，論文的撰寫還達不到學校規定的要求。主要體現在：文獻查閱得不夠全面；數據處理不科學；結論不能體現題目的創新性；格式不規范。產生這一問題的原因主要有兩個。其一，指導教師對畢業論文畢業論文審核不嚴格，甚至有些指導教師對學校制定的論文撰寫規范也不清楚。其二，學生在論文撰寫過程中不夠主動，科研論文寫作知識匱乏，過度依賴指導教師。
二、園藝專業畢業設計教學中存在的問題
1.學生對畢業設計的重視程度不夠。園藝專業的特點決定了畢業論文的完成具有季節性和時間長的特點，這使畢業設計的進行在時間上與就業或考研有一定的沖突。而且，由于就業壓力的增大，大四畢業生將大部分的精力都投入到了找工作和各類資格考試中，有的學生甚至犧牲畢業設計的時間去學習外語。在論文撰寫期間一些同學要么輾轉各地尋找工作，要么忙于研究生面試和復試。在這種情況下，學生不可能完成高質量的畢業論文。
2.指導教師指導工作不夠到位。學生在選擇指導教師時，傾向于經驗豐富、威望高的老教師，這些高水平教師的科研任務往往也比較重，如加上過重的畢業生論文指導工作，隨著畢業生數量的不斷增加，會出現部分教師對畢業設計工作投入的精力不足的情況。而與老教師相比，青年教師雖然可以投入更多的精力，但由于缺少科研和教學的經歷，對畢業論文的指導質量也不高。
三、提高畢業設計質量的幾點建議
1.關于畢業設計選題時期。為了解決園藝專業畢業設計與就業相沖突的問題，可組織學生提前進入畢業設計，在大二下學期就組織選題，為學生介紹指導教師及各指導教師的科研方向。讓學生根據自己感興趣的課題進行資料搜集及文獻閱讀。使學生利用學習之余做畢業設計的準備工作，例如，查閱資料、制定實施方案、做實驗準備等，甚至在可能的情況下進行一些實驗。
2.關于教師的指導。畢業設計是一項重要的育人工作，應特別注意加強教師的職業道德和人格修養，選擇責任心強的教師作為指導教師。對于教師的指導，首先是課題的選擇，要有助于學生掌握本專業的基本功，鞏固、拓寬和綜合運用在學習中獲得的知識。同時，選題與行業發展、學生出口相結合。高等教育的目的就是為社會塑造高水平的勞動者，而絕大多數學生學習的最終目的是為了擇業，所以，畢業設計題目的選擇必須與行業技術、市場經濟的發展相結合，能夠為學生適應社會、適應工作創造條件。本科畢業生的出口基本上就是工作和讀研兩種選擇，對于這兩類學生，在確定畢業設計題目時最好能夠因材施教：對于就業的同學盡可能選擇技術性題目，對于讀研的同學盡可能選擇技術與理論相結合、研究型的題目。教師在指導過程中要注重啟發學生的開創精神，注意理論與實際的結合。還可以和實習的企業及基地合作實行企業高校雙導師制。對于科研任務重的教師，可以培養研究生參與教學，以研究生帶本科生，在培養了本科生的同時也鍛煉了研究生。在激勵青年老師參加科研和教學工作，培養其科研教學能力的同時，還可采取老教師與青年教師形成畢業設計指導小組的方式，彌補青年教師經驗不足及老教師投入精力有限的缺陷。
3.關于畢業設計教學資源不足的問題。為了解決本科畢業設計教學資源不足的問題，一方面要加大對本科教學經費的投入，另一方面鼓勵科研經費充足的教師，將本科生發展為科研力量的一部分，讓本科生畢業設計的工作參予到課題研究中去。
4.關于畢業論文的撰寫。畢業論文的撰寫過程是培養學生研究能力的重要環節。指導教師應多提意見和建議，少給“答案”，注重發揮學生的主動性，但要再關鍵階段給予必要的引導和監督?？赏ㄟ^開設“專業文獻查閱與論文撰寫實訓”課程解決學生論文寫作能力差的問題，通過該課程的學習，使學生能掌握專業文獻查閱的方法和數據處理的技能，熟悉論文撰寫的方法及基本要求。
四、結論
本科畢業論文在園藝人才培養中具有不可替代的作用，它是培養大學生實踐能力、創新能力和創造精神，提升本科教學水平的一個重要環節。本文提出了避免畢業論文流于形式的一些建議和方法。通過論文的選題、論文時間安排、教師指導、管理等多方面措施，使畢業論文達到園藝專業人才培養的目的。
參考文獻：
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[3]宋文彬.本科畢業設計中素質與能力培養的思考[J].中國科教創新導刊，2009，（16）：113.
這個我們剛寫過的。論文的格式很老套、也別寫得太有花樣。和一般的報告差不多的。這個我們剛寫過的。論文的格式很老套、也別寫得太有花樣。和一般的報告差不多的。應編寫成注釋說明匯集表予以列出。二、畢業論文（設計）書寫格式及裝訂1、畢業論文（設計）裝訂為橫開本，使用統一的封面，左側裝訂。畢業論文（設計）封面的中文題目、英文題目及學生姓名、班級、學號、學院、專業與指導教師等欄目，要用楷書書寫，端正、整潔，有條件的學生可以打印輸出。2、目錄格式（空2行）（3號黑體）目錄（3號黑體，居中）引言（或緒論）（或作為正文第1章，4號宋體．吉林大學工商企業管理專業自考學士學位申請有什么具體要求？09年吉林大學自考工商企業管理專業論文申請時間是？我是長春大學的大一新生，想報名吉林大學的工商企業管理二學歷！本科畢業論文格式我今年最后一次自考 ，考的是吉大工商企業管理本科證！ 他們要求我們交工商企業管．
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這個東西還是要靠自己來搞海洋生物資源與環境 理論與應用力學電子信息科學與技術 微電子學 光信息科學與技術 信息安全(信息科學技術) 光電子技術科學 材料物理 材料化學 環境科學 生態學資源環境科學 心理學 應用心理學 統計學 系統科學與工程 教育學 教育學 學前教育 特殊教育 教育技術學 小學教育 人文教育 科學教育 華文教育 體育教育 運動訓練 社會體育 運動人體科學民族傳統體育 運動康復與健康 農藝教育 園藝教育 林木生產教育 特用作物教育/特用動物教育 水產養殖教育 應用生物教育 農業機械教育農業建筑與環境控．遼寧大學自考畢業論文格式？大連水產學院漁業管理專業成人自考畢業論文格式請好心人解答一下：黑龍江大學經濟法自考畢業論文格式要求和字數中南大學英語本科自考畢業論文格式自考畢業論文格式又是怎么樣的？急用參考
紅河學院畢業論文格式
已經有了雅思成績6.5 想我是紅河學院的大四學生，想參加2011年的國考，不知道在哪里看考試大綱紅河學院2009年12月份四級準考證前6為是多少？ 誰能告訴我下啊?我忘記準在紅河學院培訓的時候遇到一個女孩,感覺還不錯,彼此聯絡了一個月,突然間昆明到紅河學院怎么．
關鍵詞 植物保護專業；實踐教學；改革；實踐
中圖分類號 G642.0 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2012）03-0037-03
Reformation and Practice of Practice Teaching System for Plant Protection Specialty
LIN Qiao-ling HE Hong * YI Run-hua
（Agricultural College，Guangdong Ocean University，Zhanjiang Guangdong 524088）
Abstract The status reformation and practice of practices teaching system for plant protection specialty in Guangdong Ocean University were introduced，including methods and content，open laboratories，construction of training bases and thesis management，etc. By preliminary trying，the results showed that the teaching reformation promoted students' operative skill and ability to analyze and solve problems，and improved their professional quality，stimulated their learning interest.
Key words plant protection specialty；practice teaching；reform；pratice
植物保護專業是傳統植物生產類主干專業之一。該專業主要培養具有植物保護科學的基本理論、基本知識和基本技能，能在農業及其他相關領域從事植物保護工作的技術與設計、推廣與開發、經營與管理、教學與科研等工作的應用型、復合型人才。目前，廣東海洋大學植物保護專業畢業生多數到農化企業或鄉鎮農技部門就業，從事農藥營銷、植保技術服務等工作，還有部分學生讀研繼續深造。這不僅要求畢業生要具備較寬的基礎理論和專業知識，還應具備較強的實踐動手操作能力和創新能力。而在以往的實踐教學環節中，其課程設置往往是理論課的從屬，存在諸多問題，不利于學生實踐能力和創新能力的培養。為此，國內不少農業院校都已就植物保護專業實踐教學體系進行了探索和改革[1-12]。廣東海洋大學積極借鑒其他高校的經驗，采取多種措施強化實踐教學，以滿足植物保護專業實踐教學的需要，為培養出高素質人才奠定了基礎。
1 教學方法與內容的改革
1.1 教學方法改革
過去實踐性教學環節的教學主要是根據課堂學習的內容進行驗證性教學，該種教學方式不利于培養學生創新思維、創造和動手能力。為此，廣東海洋大學在教學方法上主要采取了以下改革措施：一是采用啟發式教學和討論式教學，在實驗教學中充分發揮學生的主體作用，調動學生的積極性和創造性。在上實驗課前一周教師提前給學生安排討論的題目，讓學生通過查閱資料、上網搜索等做好準備。在討論過程中，教師認真傾聽，結合學生討論的實際，做好引導，進行必要的提示、點撥、設疑、答疑等。二是結合病蟲害發生的特點實施現場教學。如農業昆蟲學與農業植物病理學等實驗課上，教師可針對教學內容適時帶領學生走出教室，深入田間地頭，觀察識別病蟲，采集病蟲害標本，跟隨指導解疑。通過此過程，學生身臨其境，形象生動地觀察認識了以往只在課本和PPT上看到的常見病蟲害，也掌握了常見病蟲害的發生規律，大大提高了其學習興趣。三是鼓勵學生采集標本，參與教具制作，提高其實踐動手能力。廣東海洋大學校園周邊植被豐富，是一個天然的植物標本貯藏庫。根據季節和植物的生長發育周期，組織學生制作成套病蟲害標本，不僅可以強化學生的動手操作能力，還能豐富實驗室的標本貯藏量，為學生的實驗教學增加教學內容，一舉兩得。
1.2 教學內容改革
植物保護專業許多課程實驗都屬于驗證性內容，如普通昆蟲學和普通植物病理學實驗內容多是對常見昆蟲和病菌的識別與鑒定，以往學生只要按實驗指導步驟進行操作就能順利完成實驗，這樣學生只能掌握基本的實驗操作技能和常規的實驗儀器設備使用方法，但缺乏動腦思考、分析問題與解決問題能力的鍛煉，使得真正能夠合理地設計實驗并就實驗提出問題和解決辦法的學生不多。為改變此弊端，廣東海洋大學開展了以下內容的改革：一是在課程實驗教學內容和形式上增加了技能性、設計型綜合實驗。如在普通植物病理學實驗項目中增加了植物病原菌分離及其培養基設計這一綜合性實驗項目，讓學生自己采集各種植物病害標本，并根據病原菌的特性，設計、配制培養基，通過比較分析各種培養基對病原菌生長、分離效果的影響，培養學生的創新思維和動手能力。二是在教學計劃中增設了技能訓練課，以強化學生的專業技能訓練。技能訓練課包括植物病理學基礎、昆蟲學基礎、植物病害防控、農業害蟲防控等四大模塊，每個技能訓練課20個學時，形成了基本實驗操作能力與專業技能、專業技術應用有機結合的實踐教學體系。三是實驗課與生產實習相結合，生產實習與社會需求相結合。根據農業生產現狀和出現的新問題，設計實習的內容。課程的實驗課與生產實習結合，使學生在掌握基本操作的前提下，培養學生的創新思維和動手能力。如農業昆蟲學實驗課與生產實者有機結合在一起，可以幫助學生了解害蟲的發生以及生物學特點，進一步提出防治的方法與措施，并在實踐實習中加以確認。學生覺得能學以致用，從而激發了其學習興趣，鍛煉了其創新思維和動手能力。
2 開放實驗室，推行本科生科研導師制
以往的實驗室管理，儀器分散，功能不全，利用率低，相互獨立。部分實驗室僅供學生上課使用，不對本科生進行開放，不利于培養學生的動手能力。為此，廣東海洋大學對實驗室進行整改，把教學實驗室與科研實驗室進行整合，成立大植保實驗平臺，實驗室總面積近1 000 m2，近3年來添置實驗儀器設備費用超過300萬元。實驗室由專人負責，做到人、財、物資源共享，實行全天候開放實驗室制度，對本專業學生全面開放。學生可利用課余時間及周末與寒暑假時間自由出入實驗室，大大方便了學生做實驗。同時推行本科生科研導師制，由指導老師負責本科生科研選題及實驗室安全、衛生等問題，避免學生盲目操作。本科生與導師實行雙向選擇，導師可以挑選學生，學生也可以自由選擇理想的導師。導師可以先為學生選擇研究主題，通過研究實踐，使學生逐步掌握選題的技巧。特別是導師自己有科研課題時，能夠讓學生盡早參與課題的研究，對鍛煉和培養本科生的科研能力是十分必要的。同時，學生隨導師進入相應的實驗室，與其他研究生一起，協助導師做些教學和科研的輔助工作，增加了其實踐機會，增強對其的科研能力和創新能力的培養力度。實踐證明，學生對科研導師制反響較大，參與積極性很高，班級學生參與率幾乎達到100%。同時廣東海洋大學還利用該實驗室平臺，鼓勵學生積極參與廣東省和學校組織的大學生科技創新大賽、挑戰杯等活動，取得了良好的效果。近年來，已有多名學生獲得校級以上創新大賽或挑戰杯競賽獎項，在核心刊物上發表了多篇研究論文。
3 實訓基地的建設
實訓基地是保證學生實踐教學順利進行的必備條件，是培養學生動手能力、實際操作能力的重要基地，也是直接影響教學質量的重要因素。為確實提高植物保護專業學生的實踐能力，廣東海洋大學因地制宜在校內外建立了較為完備的實訓基地。
3.1 校內實訓基地建設
植物保護專業是隸屬于廣東海洋大學農學院11個涉農的本科專業之一，為搞好該專業的校內實訓基地，廣東海洋大學充分利用學院已建有的農業生物技術研究所和園藝研究所等條件，并結合學院其他專業如農學、生物技術、園林、園藝等相關專業的校內教學、科研、生產等資源，在校內建立了水稻、甘蔗、果樹、蔬菜及熱帶植物等病蟲害觀測圃，為相關專業課程從“黑板”教學走向“現場”教學，將書本上抽象的“植物病蟲發生與防治”變得具體、生動、形象，為實現理論與生產實踐的無縫對接等奠定了堅實基礎。同時，該專業還組織學生按作物種類對其病蟲害發生情況進行定期或不定期調查，以了解、掌握校內各主要作物病蟲害的發生與發展規律，并根據病蟲害的發生規律，結合課堂教學內容，對其防治策略與防治方法提出建議，較好地實現了理論知識與生產實際的結合，大大激發了學生學習的積極性和創造性，提高了學生發現問題、分析問題與解決問題的能力。
3.2 校外實訓基地建設
校外實訓基地建設是理論與實踐相結合，提高學生的實際工作能力，鍛煉、培養學生的職業技能與職業道德極為重要的一環。在充分利用校內實訓基地的同時，廣東海洋大學加強了校外實踐教學基地的建設。結合當地熱帶農業特色，廣東海洋大學分別建立了南亞所熱帶植物實習基地、廉江紅橙實習基地、徐聞香蕉與蔬菜實習基地、雷州蠶桑實習基地及湖光農場實習基地等多個校外實訓基地，不僅提高了專業課程的教學質量，同時也保證了學生生產實習的順利進行。
4 強化畢業論文（設計）管理與指導
畢業論文（設計）是學生4年所學知識的綜合應用，是學生理論水平、操作技能與發現問題、分析問題與解決問題能力及創造性的集中反映，是衡量教學質量與教學水平的重要指標。為提高學生畢業論文質量與水平，結合農科專業高等教育特點，廣東海洋大學在學生畢業論文（設計）管理與指導工作中進行了如下改革。一是嚴把畢業論文選題與內容關。要求學生的畢業論文必須是一人一題，論文是在導師的指導下由學生獨立完成的；論文內容必須是學術研究性論文，不僅要有廣度，還要有一定的深度和創新性。二是嚴把指導教師關。要求指導畢業論文的教師必須有課題支持，以鼓勵學生參與科學研究，培養學生的創新能力。三是嚴把畢業論文答辯關。答辯時專業成立畢業論文答辯委員會，對學生畢業論文的選題、內容、格式、獨創性等進行全面嚴格審查，對不合要求的論文一律不準答辯；答辯時要求每人進行獨立答辯，由答辯委員根據學生畢業論文的水平、答辯表現等，對每個學生的畢業論文答辯做出客觀、公正評價。四是強化了畢業論文的過程管理。要求學生的畢業論文必須有開題報告、中期檢查報告、指導教師意見、評閱教師意見等。為保證學生能順利完成畢業論文的研究工作，廣東海洋大學除建立植物保護專業實驗室平臺、建立全天候開放實驗室制度外，在教學安排上也進行了一系列的改革與調整，在學生進入三年級時即開始安排、組織學生進行畢業論文撰寫工作，以保證學生有充足的時間開展畢業論文的研究工作，一改過去四年級時才開始進行畢業論文研究工作的狀況，這樣不僅在時間跨度上可以涵蓋農作物一個完整的生長發育期，以保證研究資料的完整性、系統性和可靠性，同時為學生留出充足的時間進行認真思考與總結，確保畢業論文的質量與水平。通過改革，該專業學生畢業論文的選題范圍逐步擴大，研究深度得到了進一步的拓展，學生的科研能力和創新意識得到進一步增強，畢業論文的質量和水平得到明顯的提高，已有多篇畢業論文在校內外學術期刊上發表。
5 結語
通過對植物保護專業實踐教學體系的改革和實踐，激發了學生對該專業的學習興趣，增強了學生的實踐能力、自學能力和創新能力，也使學生分析問題、解決問題的能力得到提高；同時，明顯提升該專業的教學水平、教學效果、教學質量，逐年提高學生就業率，受到學生和用人單位的充分肯定。但由于植物保護專業涉及面廣，又受地域等主客觀條件限制，雖然改革取得了一定的成績，但這只是一個初步的嘗試，還需要不斷探索和改進，廣東海洋大學將不斷努力，確保植物保護專業實踐教學體系更加完善，為社會培養更多具有較高綜合素質、適宜和促進社會經濟發展的植物保護專業人才。
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生物技術是分子遺傳學、生物化學、微生物學等基礎學科發展的產物。作為一種高新技術,生物技術在整個科學領域中占據了越來越顯著的地位。作為世界新技術革命的重要組成部分,生物技術已經成為人類徹底認識和改造自然界,克服人類自身所面臨的人口膨脹、糧食短缺、環境污染、疾病危害、能源資源匱乏等一系列重大問題的有效手段和工具[1]。
目前在黃瓜育種中,廣大科研工作者利用生物技術結合常規育種方法,創新了一大批含有優異基因的黃瓜育種材料,培育出多個豐產、優質、多抗品種。生物技術在黃瓜遺傳育種上的應用非常廣泛,下面介紹在這方面已取得的一些重要進展。
2分子標記技術在黃瓜遺傳育種中的應用
2.1黃瓜基因的分子標記
開展基因分子標記研究是進行分子標記輔助選擇育種、分離和克隆基因的基礎?！笆濉逼陂g,我國科研工作者建立了適合黃瓜的RAPD、AFLP和SSR標記的優化反應體系,并對黃瓜的多個基因進行了分子標記。
錢忠英等[2]優化的黃瓜RAPD反應體系為:PCR程序94 ℃預變性3 min,94 ℃變性30 s,37 ℃復性30 s,72 ℃延伸2 min,循環40周,最后72 ℃延伸7 min為佳;模板DNA的適宜濃度為2.5～5 ng/μL,引物濃度為0.6 mol/μL,dNTPs濃度為0.25 mmol/L,Mg2+濃度為1.875 mmol/L。張桂華等[3]建立了適合黃瓜的AFLP反應體系:在50μL酶切連接體系中,取300 ng基因組DNA進行雙酶切和接頭連接,然后取4μL酶切連接產物進行預擴增,預擴增產物稀釋30倍后,采用“2+3”選擇性擴增引物組合用于選擇性擴增可以得到很好的擴增效果。葛風偉[4]等摸索了適宜黃瓜的SSR反應體系,認為在25Μl PCR反應體系中,Mg2+的最適濃度為0.2 mmol/L;dNTP最適濃度為0.2 mmol/L;反應體系中Taq聚合酶宜加入1U,引物應加入30 ng;DNA最適濃度為5 ng/μL。另外,劉殿林[5]、張正奇[6]、孫敏[7]等也對黃瓜基因組DNA提取方法和RAPD反應體系進行了探索。
基因分子標記方面,陳勁楓等[8]利用RAPD技術獲得了黃瓜全雌性特異的片段B111000。婁群峰等[9]篩選得到了與黃瓜全雌性F基因連鎖距離為6.7 cM的AFLP標記TG/CAC234,并將該標記轉化為SCAR標記SA166。張桂華等[10]找到2個與白粉病抗病相關基因連鎖距離為5.56 cM的AFLP標記,目標片段的大小分別為238 bp和236 bp。張素勤等[11]研究并獲得了與控制黃瓜霜霉病和白粉病的感病QTLs均緊密連鎖的顯性AFLP標記:E25M632-103。該標記從分子水平說明黃瓜霜霉病和白粉病的某個感病QTLs是連鎖的。丁國華[12]篩選得到與抗霜霉病基因dm連鎖不十分密切的CsRGA3標記。在dm和CsRGA3之間還檢測到黃瓜白粉病抗病基因pm的存在,顯示了dm和pm存在連鎖關系。國艷梅[13]篩選到的AFLP標記E4M6和E5M5,分別與黃瓜營養部分苦味基因Bi連鎖,距離15.0 cM;和不苦基因bi連鎖,距離18.8 cM。顧興芳等[14]找到了與黃瓜果實苦味基因Bt緊密連鎖的兩個顯性AFLP標記E23M662-101和E25M652-213,與Bt的遺傳距離分別為5 cM和4 cM,且位于Bt兩側。Thomas等[15]以WⅡ983G×Strait8的55個F2+代個體和Iudm1×Strait8的90個F2+代為研究群體,從960對RAPD引物產生的135個多態性標記中篩選出5個與黃瓜霜霉病基因(dm)緊密連鎖的標記:G14-800、X15-1100、AS5-800、BC519-1100和BC526-1000。
2.2黃瓜遺傳圖譜的構建與基因定位
1994年,Kennard等[16]以G421×H-19獲得的F2+群體為材料,構建了一張總長為766 cM的遺傳圖譜,該圖譜由10個連鎖群組成,包含了58個位點標記,2個位點之間的平均距離為(21±8)cM。同時利用種間雜交GY14×PⅡ83967獲得F2+群體構建了含有70個位點,10個連鎖組群,總長480 cM的連鎖圖譜。1997年,Serquen等[17]以G421×H219雜交的100個F2+株系為試材利用RAPD技術構建了一個含有80個位點的連鎖圖譜,包含了77個RAPD標記,3個形態標記,分為9個連鎖組群,整合長度628 cM,平均標記間隔7.8 cM。
2000年,Danin-Poleg等[18]以GY14×PⅡ83967為材料,用SSR標記技術構建了黃瓜的遺傳圖譜,將14個SSR標記定位到8個連鎖組群中,整合圖譜總長為783.2 cM,并發現其中有9個標記與甜瓜相同。Bradeen等[19]利用Joinmap軟件,以G421×H219的雜交后代群體為研究對象,整合出含有10個連鎖群,255個標記,總長為538.6 cM的遺傳圖譜,平均標記間隔為2.3 cM。又以GY14×PⅡ83967為材料,構建了一張包括了15個連鎖組群,197個標記,整合圖譜長度為450.1 cM的黃瓜遺傳圖譜。Park等[20]利用對番木瓜環斑病毒(PRSV-W)和南瓜花葉病毒(ZYMV)敏感的“Straight8”和對PRSV-W、ZYMV有抗性的TMG1(TaichungMouGua)的F6代重組自交系(RLs)為材料,構建了包含353個位點,12個連鎖組群的連鎖圖譜。Fazio等[21]采用G421×H219獲得的171個RLs和216個F2+單株構建了包含14個SSR標記、24個SCAR標記、27個AFLP標記、62個RAPD標記、1個SNP標記和3個重要形態學標記(雌性,有限生長和小葉),分為7個連鎖組群,總長為706 cM的遺傳圖譜。Young等[22]以黃瓜抗病毒和感病毒的親本組成的重組自交系進行AFLP、RAPD、RFLP標記,并構建了353個位點的黃瓜圖譜。
“十五”期間,我國科研工作者構建了2張黃瓜遺傳圖譜,其一是張海英等[23]利用黃瓜重組自交系為作圖群體,構建的包含9個連鎖組群,共有234個分子標記的連鎖圖譜,其中包括141個AFLP標記、4個SSR標記和89個RAPD標記,覆蓋基因組長度727.5 cM,平均圖距3.1 cM。應用該圖譜對控制黃瓜耐弱光的數量性狀基因(QTL)進行了研究,將影響葉面積增長量的5個QTL分別定位在LG1、LG7和LG9連鎖群[24]。其二為李效尊等[25]利用F2+代群體,構建的包含77個SRAP標記和79個RAPD標記的遺傳圖譜,分屬4個大的連鎖群和5個小的連鎖群,總長度1110.0 cM,平均間距為13.7 cM。并將側枝基因(lb)定位在一個大的連鎖群上,其兩側標記是OP-Q5-1和OP-M-2-2,與lb的間距分別是9.3 cM和15.9 cM;將全雌性基因(f)定位在一個小的連鎖群上,其兩側標記是OP-Q5-2和BC151,與f的間距分別是13.8 cM和13.6 cM。
2.3分子標記在黃瓜親緣關系和遺傳多樣性上的研究
分子標記技術以其準確性高、速度快、周期短而較多地應用于黃瓜種質親緣關系分析和種質資源多樣性檢測方面。利用RAPD標記進行研究的報道有:張海英等[26]分析了華北型與歐洲溫室型品種的雜交后代的遺傳漂移情況,進行了初步的遺傳分析以及F2+個體的基因型分析。劉殿林等[27]分析了39份黃瓜材料的遺傳差異,不同材料間的遺傳距離(D)在0.0642～0.592之間,并根據遺傳距離,按UWPGA法進行了聚類分析。夏立新等[28]計算出黃瓜親本間分子遺傳距離,研究了田間園藝性狀與分子遺傳距離間各種相關曲線的相關系數。陳勁楓等[29]對黃瓜屬的22份材料的親緣關系進行了研究,聚類分析為2群:CS群(黃瓜、西南野黃瓜及野黃瓜)和CM群(甜瓜、菜瓜、野生小黃瓜及非洲角黃瓜)。莊飛云等[30]也將23份材料按親緣關系聚類為黃瓜、近緣野生種、種間雜交種和甜瓜亞屬種4類。李錫香等[31]分析了66份黃瓜種質基因組DNA,將供試種質分為8個組群。另外,利用RAPD標記可以從分子水平上探測黃瓜親本自交系與其雜種F1代的遺傳差異[32]。
AFLP技術也經常用在親緣關系和遺傳多樣性研究上面。王志峰等[33]利用AFLP技術對包括80份山東黃瓜地方品種和24份其他地區品種的遺傳親緣關系進行了研究,聚類分析結果顯示:山東黃瓜地方品種與日本品種和歐美品種分屬不同類群或亞類群,山東地方品種分為8組,各組內生態類型基本一致。AFLP分析計算出15份密刺類黃瓜品種的遺傳距離在0.033～0.686之間,聚類分析分為8類,新泰密刺和山東密刺遺傳差異較小,與長春密刺遺傳差異較大[34]。李錫香等[35]以8對引物對70份不同來源的野生和栽培黃瓜種質基因組DNA進行AFLP分析,將供試種質聚類為3大種群:西雙版納黃瓜組群、印度野生黃瓜組群和栽培黃瓜組群。Zhuang等[36]用RAPD和SSR分析黃瓜野生種、半野生種的親緣關系,二者的遺傳分析結果具有很高的協調性,二者遺傳距離的相關系數為0.94。
另外,李俊英等[37]發現在不同黃瓜品種的線粒體中存在類質粒分布的差異,其存在有一定隨機性,不同品種中的同一種類質粒間具有同源性。
2.4黃瓜基因的克隆與表達
黃瓜基因克隆有多篇報道?？祰蟮萚38]克隆得到了在黃瓜冷敏型品種低溫鍛煉異表達基因的cDN段(ccr18),大小為639 bp。在基因組中以單拷貝或低拷貝形式存在。ccr18基因與黃瓜低溫鍛煉相關,與擬南芥染色體IIIBAC庫中的F14P3基因組序列具有88 %的同源性。白吉剛等[39]擴增出黃瓜生長素結合蛋白基因(ABPl)cDN段,大小約為800 bp,該基因在開花前1 d的子房中表達信號較弱,在授粉后2 d、4 d和6 d的幼果中表達增強。丁國華等[40]利用簡并引物從黃瓜基因組DNA中分離得到15條同時具有特征保守域結構的NBS類型抗病基因同源序列(RGA),翻譯產物與許多抗病蛋白有較高的同源性。
牛林海[41]克隆了黃瓜HMG(high mobility group proteins)基因,并認為該基因是單拷貝,具有組織特異性表達,在根中表達最強。葉青靜[42]測定了黃瓜果實組織中的與細胞分裂相關的精氨酸脫羧酶(ADC)基因cDNA序列(約1.83 kb)、與細胞膨大有關的擴張蛋白基因cDNA序列(約786 bp)以及一條酸性轉化酶的cDNA全長序列(約2.25 kb)。李志英[43]獲得了正常和“花打頂”黃瓜之間的2個差異片段所在基因的全長cDNA序列,分別定名為CUATP和CuADC?！盎ù蝽敗敝仓曛蠧UATP的表達明顯減少,而CuADC表達量增加。梅茜[44]構建了黃瓜幼果的cDNA文庫,得到139個表達序列標簽(ESTs),其中有97條與已知基因高度相似,36條為低度相似序列,在GenBank中未找到匹配同源序列的ESTs為6個。婁群峰[45]從中國弱雌性黃瓜中克隆出了全長為1024 bp的ACC合酶基因,包含6個開放閱讀框,不同生態型黃瓜中ACC合酶基因序列保守性很強。不具有性型特異性,但在植株不同部位表達程度存在明顯差異。
2.5黃瓜雜種純度及品種指紋圖譜分析
黃瓜種子純度鑒定的常規方法是根據田間表現性狀進行鑒定,后來發展為利用同工酶的方法,但二者都有一定的缺陷。利用分子標記技術鑒定黃瓜種子純度,可以在苗期甚至種子階段進行,高效快速、穩定可靠?？朔藗鹘y田間檢驗要根據植株園藝性狀進行而導致的費時、費力等缺點。但相關報道比較少。
王和勇[46]研究表明,黃瓜不同組織器官的DNA對RAPD擴增無影響,均可獲得一致的指紋圖譜,并建立了種子純度鑒定的RAPD的反應體系。孫敏[47]等通過RAPD標記鑒定和分析了黃瓜品種真實性,也建立了適宜黃瓜種子純度鑒定的RAPD指紋圖譜。金紅等[48]研究了抗除草劑基因在黃瓜雜種純度快速鑒定上的應用,摸索出田間抗性鑒定和室內種子抗性鑒定的除草劑臨界濃度,建立了一套在種子發芽階段或2片真葉期進行黃瓜雜交種純度鑒定的新技術。
2.6分子技術鑒定黃瓜病害
王惠哲等[49]以感病組織和健康組織總RNA為模板,進行cDNA合成和PCR擴增,對75份黃瓜病毒病樣本進行了檢測,結果從感病組織中擴增出與預期的425 bp大小一致的目標片段,而健康組織無此擴增產物;29份材料檢測到TMV,檢出率達38.67 %。同樣的方法,也檢測到黃瓜上的西瓜花葉病毒2號(WMV22)[50]。李淑菊等[51]利用RT-PCR對黃瓜病毒毒原種類進行檢測。陳潔云等[52]用同樣技術明確了ZYMV和CMV是浙江及其周邊地區侵染葫蘆科植物最主要的病毒種類,夏季CMV普遍發生,ZYMV主要發生在秋季。
3黃瓜組培技術與單倍體和三倍體培養
利用對黃瓜離體組織的培養,通過愈傷組織和胚狀體兩條途徑均可獲得再生植株。何曉明等[53]建立了子葉及下胚軸離體培養體系,通過愈傷組織分化出的不定芽獲得再生植株。郭德章等[54]將分離純化的黃瓜子葉原生質體,培養于mKM8p液體培養基中,原生質體可持續分裂至愈傷組織形成。當再生的愈傷組織直徑達0.5～1.5 cm時,及時轉入改良的MS附加不同生長激素的培養基上誘導分化及再生,結果產生大量體胚并再生成植株。
不少報道對黃瓜組織培養的影響因素做了探討。侯愛菊等[55]認為外植體類型、基因型及植物生長調節劑對誘導黃瓜直接器官發生有顯著影響,子葉節是最佳的外植體類型。楊愛馥等[56]研究認為愈傷組織誘導階段和胚胎發生階段分別采用9 %和6 %的蔗糖濃度,可促進體細胞胚胎發生;胚誘導培養基中添加6-BA 0.5 mg/L,以及愈傷組織誘導階段甘露醇與蔗糖配合使用,可提高體細胞胚胎發生率。梅茜等[57]研究表明,苗齡和ABA是影響子葉分化形成不定芽的顯著因素;加入適量的AgNO3可改善黃瓜愈傷組織的質地、促進芽的形成。與曹利仙等[58]試驗結果相同。郭德章等[54]認為Ca2+濃度對黃瓜原生質體的穩定和細胞分裂有重要影響。李云等[59]研究后認為赤霉素處理離體黃瓜子葉不能誘導花芽分化,萘乙酸的促進作用不明顯,激動素KT1.0誘導花芽分化的頻率最高。但周俊輝等[60]認為l/2 MS培養基中附加0.10 mg/L 6-BA能顯著提高離體黃瓜子葉的開花率,White培養基中附加2.00 mg/L的KT開花率也有明顯提高。相同濃度的L-丙氨酸和L-酪氨酸均明顯促進黃瓜子葉開花,而甘氨酸對黃瓜子葉開花則有一定的抑制。
在黃瓜單倍體和多倍體培養方面,杜勝利等[61]在國內首次建立了一整套通過未受房離體培養產生黃瓜單倍體植株的技術體系,再生頻率達25 %。雷春等[62]通過射線輻射花粉授粉并結合胚培養從3個基因型中獲得了單倍體植株。陳勁楓等[63]研究了異源三倍體黃瓜的離體繁殖的培養基配方最佳的不定芽誘導培養基為:MS + 6-BA 2.2 mg/L和MS + 3.0 mg/L KT + 0.2 mg/L NAA,然后叢生芽在MS + 0.2 mg/L 6-BA的培養基上伸長大約10 d后取整齊一致的芽在1/2 MS + 0.2 mg/L 6-BA培養基上生根。
4黃瓜遺傳轉化體系建立及基因工程改良
基因工程技術是現代生物技術改良作物品種的關鍵技術之一,在農業生產中有著廣泛的應用前景。可應用于黃瓜上的轉基因方法有農桿菌介導法、基因槍法、花粉管通道法和電激法等,目前以農桿菌介導法為主要方法。近幾年來,廣大科研工作者研究和建立了黃瓜高效遺傳轉化體系,并通過農桿菌介導將CMV-CP、CBF3、Cor15A、Chi、Glu、CTB/CS3、RS等基因導入黃瓜基因組。
陳崢等[64]的研究表明,在共培養的菌液中添加乙酰丁香酮,明顯提高外植體的愈傷組織誘導率;延長農桿菌與外植體的共浸染時間至40 min,外植體的存活率和出芽率顯著提高。姚春娜等[65]試驗表明,超聲波處理可以明顯提高農桿菌對外植體的轉化頻率。侯愛菊等[66]建立了一套黃瓜遺傳轉化體系,適宜的選擇壓力為卡那霉素30 mg/L。金紅等[67]也對影響遺傳轉化體系的因素進行了摸索。于靜[68]、孫蘭英[69]、趙雋等[70]均認為子葉節是黃瓜遺傳轉化體系的最佳外植體,最適宜的芽誘導培養基為MS + 6-BA 0.5 mg/L;子葉節預培養1～2 d,在添加6-BA 0.5 mg/L、乙酰丁香酮100μmo1/L,pH 5.2的MS培養基上進行培養,遺傳轉化效率最高。利用TDZ從子葉節上誘導出再生芽,效果優于BA。
金紅等[67]將抗除草劑基因bar導入到黃瓜子葉中,獲得落地轉化株系。鄧小燕等[71]構建成植物表達載體Pbinp-35S-CBF3。通過農桿菌介導轉化黃瓜子葉,獲得了具有卡那霉素抗性的黃瓜再生植株。張興國[72]等也將冷cbf3基因和corl5a抗寒基因導入黃瓜基因組,創制出耐寒黃瓜新材料。白吉剛等[73,74]將擬南芥生長素結合蛋白基因轉化黃瓜,獲得的轉基因植株單性結實能力增強。通過黃瓜離體子葉不定芽再生體系,陳麗梅[75]和林建麗[76]已分別將熒光素基因(luc)、ATT1基因和花生白黎蘆醇合酶(RS)基因導入黃瓜,獲得了陽性轉基因植株。柏錫[77]獲得了轉組織型纖溶酶原激活劑基因的黃瓜植株。張國廣[78]將來源于菜豆的幾丁質酶(Chi)基因和克隆自煙草的β-1,3-葡聚糖酶(Glu)基因導入3個基因型的黃瓜基因組中。侯愛菊[66]、孫蘭英[69]和楊成德[79]也利用農桿菌介導法將菜豆幾丁質酶基因導入黃瓜。
5存在問題及展望
黃瓜有7對染色體,染色體組總長度750～1 000 cM,高飽和的分子連鎖圖應具有7個連鎖群。目前構建的遺傳圖譜相對不飽和,整合后的連鎖圖譜雖然密度增加,但是不能覆蓋整個基因組。被定位到圖譜上的分子標記不多,與重要性狀緊密連鎖的標記就更少。因此,仍需對黃瓜分子標記進行研究,找到與性狀緊密連鎖的標記,為分子標記輔助育種和基因的定位克隆奠定基礎。黃瓜組織培養以二倍體的研究居多,單倍體和多倍體的研究較少,黃瓜單倍體組織培養的技術在國內仍未成熟,黃瓜轉基因技術也還停留在研究階段,與實際應用還有相當差距,今后尚需進一步研究。
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