時間:2023-03-10 14:59:45
序論:在您撰寫生物監測論文時,參考他人的優秀作品可以開闊視野,小編為您整理的7篇范文,希望這些建議能夠激發您的創作熱情,引導您走向新的創作高度。
水生生物是和水環境之間是相互制約和相互依存的關系,如果水質被污染,那么相應的水生生物就會產生反應,通過對水生生物所表現出的變化就能達到對水質污染進行監測的目的。針對微生物生物群落進行監測的方法作為水質系統中重要的一部分,微生物生物群對水質的污染情況具有十分靈敏的反應。其中最常用的方法就是采用聚氨酯塑料塊法,這種方法的特點就是可以將泡沫塑料塊放進被監測的水質中,通過泡沫塊收集到的微生物對水質污染情況進行分析。針對指示物生物法進行監測在進行水質監測時,此種方法一直是非常經典的方法。其利用在水質污染的情況下,對水質中缺失的敏感微生物的種類進行檢測,進而監測到當前水質的污染情況。因指示物具有生命周期較長,活動范圍較固定的特點,因此對水質污染監測具有一定的準確性。在用于水質監測的指示生物中,大都是無脊椎動物,包括浮游動物、小顫草、脆硬剛毛藻等。
2土壤污染進行監測
土壤受到污染時所產生的影響都是間接的。通過在土壤被污染之后,土壤農作物、地下水以及人體會受到土壤污染的間接影響,通過對農作物的變化進行監測,進而判斷出土壤的污染情況。針對植物進行生物監測在土壤受到污染之后,會對種植在土壤之上的植物帶來相應的影響。植物會反應出類似于葉片受損、呼吸作用加強、生長的速度遲緩以及植物中的某些成分發生改變等等。針對動物進行生物監測在此項技術中最常用的監測方法是利用蚯蚓對土壤污染進行監測。因蚯蚓可對污染土壤中的農藥和鎘發生變化。是一種對監測土壤中鎘元素的最有效手段。微生物的監測方法微生物監測法主要是利用土壤中有關微生物的群落的有關變化進而反應出土壤受到污染的狀況。人類的糞便和尿液是土壤污染中的主要污染來源。通過對被污染土壤中異養菌的計數和分離處理之后,從而對受檢測土壤中的微生物群落所形成的相應群落中數量和結構上的變化,進而判斷出土壤受到污染的程度。污染毒性監測毒性監測指的是在自然界中的生物在受到污染之后,其生理機能和相應的遺傳物質會發生相應的改變從而反映出環境污染的程度。
3微生物檢測技術在我國的發展前景
生物檢測技術主要是利用相關生物對污染物所作出的反應來對評判出環境質量的好壞以及被污染的程度。環境所產生的效應從總體上看是以人作為核心的主體生物系統。正因為如此,生物監測對環境的評判標準具有一定的指示性,但另一方面,生物監測技術因其具有的復雜性又使生物監測技術面臨各種問題。
4結語
1.1化學儀器分析法
隨著軟電離技術的迅速發展,對于一些具有復雜結構的大分子生物聚合物,質譜法可將其進行電離分解后在電場和磁場作用下進行離子質量分析,從而獲得有機物分子式和結構信息,方法高效、快速準確。將色譜法與質譜聯用可形成更強有力的聯用分析技術,實現對極低濃度的生物樣品的含量測定和蛋白質多肽類藥物的代謝動力學研究。核磁共振是一種吸收光譜(1H-NMR和13C-NMR應用廣泛)。1H-NMR可以提供分子中氫原子所處的化學環境、相對數目以及分子構型等有關信息,13C-NMR直接提供有關分子骨架的結構信息。光譜攜帶大分子生物聚合物結構信息經過計算機處理,可確定氨基酸序列、核酸的分析和定量混合物中的各組分含量分析等。將核磁共振技術與高效液相色譜法或毛細管電泳法聯用,分析能力強大并能拓展其在生命科學領域中的應用范圍。但質譜,核磁共振儀器精密昂貴,工作環境操作技術要求高,普及性受限。
1.2生物技術分析法
生物技術分析法主要包括:免疫學法、放射性同位素示蹤法、生物鑒定法和量熱法等。免疫學法是利用蛋白質多肽抗原與相應抗體(單克隆或多克隆抗體)可以特異性識別結合的特點(結合比色法),借助顯微鏡觀察定位,對蛋白質多肽進行定性定量分析。常用免疫學方法有免疫熒光法和酶聯免疫吸附劑測定法。免疫熒光法:是將目標抗體標上熒光素,借助熒光顯微鏡進行抗原示蹤定位的檢測技術;酶聯免疫吸附劑測定法:又稱酶聯免疫法,或ELISA法,是在酶免疫技術基礎上發展起來的一種新興的免疫檢測方法,該方法是將可以催化底物發生顯色反應的酶進行標記,然后通過顯色進行分析檢測的一種前沿特殊試劑檢測方法。例如,動物血清蛋白藥物或動物性食品中農藥殘留的ELISA法建立等。而放射性同位素示蹤法則是將目標性分子或產物用放射性同位素標記(與內源物質區別),以研究目標分子或產物的體內分布、代謝行為。放射性同位素示蹤法和免疫學方法雖然能夠描述蛋白質多肽類藥物的體內動力學行為,但不能夠直接反映出蛋白質多肽類藥物的生物活性和穩定性。生物鑒定法和量熱法則分別依據生物藥物的特異性反應原理和放熱吸熱原理對藥物的生物活性和穩定性進行分析研究。例如,生物鑒定法利用組織或細胞對蛋白質多肽類藥物的某種特異反應,界定藥物是否具有生物活性,根據制劑-效應曲線對目標蛋白質多肽類藥物進行定性定量分析。量熱法則是通過測定樣品在受熱過程中的放熱和吸熱行為來研究樣品中各組分相互作用及狀態變化的一種方法,該方法多用于多肽的熱穩定和結構分析。
2結語
現代生物技術作為環境監測的主要技術,其監測水平的高低將直接影響到環境監測的精確度。現代生物技術也叫做生物工程。在分子生物學基礎上建立的創建新的生物類型或新生物機能的實用技術,是現代生物科學和工程技術相結合的產物。其特點主要包括以下幾點:
(1)可以將物種之間的界限打破。在傳統觀念中,遺傳育種過程中如物種親緣關系較遠,進行雜交成功的可能很小。更無法做到動物與植物之間的結合、細菌與動物之間的結合。但基因工程可以將這些都變為現實,可以打破的障礙;
(2)可以遵循人的意志、目的對生物遺傳特性進行定向改造,甚至進行新物種的創造,改變整個生態環境,影響到人類的進化過程;
(3)這種技術可以在遺傳物質核酸上直接進行操作,進而新生物類型創造的速度也越來越快。因為現代生物技術的特點,已經成為世界各國專家研究的焦點問題。近年來,這項技術在環境監測中已經取得了不錯的成績。本文主要對環境監測中現代生物技術的生物芯片、生物傳感兩種技術進行了分析與探究。
2 環境監測中生物芯片技術的應用
目前生物芯片已經可以對公共飲用水內的微生物改變進行實時監測,RhodeIsland大學研發出可以對水中的沙門氏菌與大腸桿菌進行瞬時監測的一種生物芯片技術。細菌檢測與鑒定系統的建立可以通過DNA芯片進行,這種方式可以對細菌的種類、濃度進行及時監測,并通過將大量的寡核苷酸探針增添到芯片上可以增強本系統的精準度、擴展其檢測范圍及提高其鑒定能力。
3 環境監測中生物傳感技術的應用
在環境監測中生物傳感技術也要進行大氣內二氧化碳、二氧化硫等含量與濃度進行分析。點位傳感器的制作可通過自養微生物與氧電極進行有效制作,起到多種離子、與揮發性酸的抗干擾作用,并對大氣環境內二氧化碳含量進行不間斷自動在線分析,這種技術具有較高的靈敏度。安培型生物傳感器的制作主要硫桿菌屬與氧電極進行有效制作,這種設備可以進行酸雨酸霧樣品內二氧化硫含量的檢測,微生物傳感器主要通過多孔氣體滲透膜、固定化硝化細菌及氧電極合成,可以對樣品內亞硝酸鈉含量進行測定。
4 結束語
以生物的免疫、基因、敏感等方面的特點為基礎,運用科學合理的方法對具有檢測功能的試劑進行制作,進而檢測食品的安全性就是生物技術在食品檢測工作中的應用原理。在食品檢測工作中,生物技術具有諸多優勢,例如速度快、范圍廣以及準確度高等。一般而言,主要的生物檢測技術有免疫技術、生物傳感器技術、生物芯片檢測技術、酶技術等。為了使我國的食品安全檢測工作得到提升和發展,我們就需積極對生物技術進行有效運用,并加大開發力度,使其發揮出更大的價值。
2.食品檢測中主要的生物檢測技術
2.1聚合酶鏈式反應技術在轉基因檢測上,聚合酶鏈式反應技術已得到了有效運用。聚合酶鏈反應簡稱為PCR,PCR技術主要通過三個階段對食品進行安全檢測,即變性、復性以及延伸。對DNA模板進行建立,將寡核苷酸作為引物,通過聚合酶作用,沿DNA模板順序以半保留復制的方式延伸而完成DNA分子復制就是PCR技術的基本原理。在依靠多次的增容以及擴展以后,PCR會變成符合食品檢測需求的檢測物。該技術由于具備諸多應用優勢,因此之后也被合理運用到了各大領域中,尤其是在食品安全檢測工作上,該技術已顯示出了較好的運用前景。但與此同時,聚合酶鏈式反應技術也存在著一些不足之處,比如食品中假若有已死亡的細菌存在,那么便會顯示為假陽性,針對制毒微生物所產生的毒素,該技術也無法進行全面檢測。
2.2生物傳感器技術在對生物傳感器分子識別原件進行選取時,需使其具有較好的選擇性。在和待測物的特異性進行結合以后,依靠對應的信號轉換器,分子識別原件所產生的光、熱等復合物可促使其進行轉化,變為能夠輸出的的電信號以及光信號,并可將其進行放大然后輸出,最后得到檢測結果。一般而言,生物傳感器具有許多優越性,例如操作簡便、敏感性高、反應速度快等,相比于傳統性質的食品檢測方法,此種檢測方法更具科學合理性。另外,運用生物傳感器技術,可使安全可靠的食品檢測系統得到建立完善。運用此技術,可使檢測所用時間得到縮短。倘若要對牛奶以及熱狗等食品中的葡萄糖球菌腸毒素進行檢測,就可促使其靈敏度得到明顯提高,并有效地控制好檢查時間。但對當前的實際情況進行分析可知,受計算機技術、生物材料等因素的影響,在食品檢測方面,生物傳感器的商業化程度仍舊不高。
2.3酶技術在對食品中的殘余農藥以及微生物污染進行檢測時,我們主要可運用到酶檢測方法,而這也是較為常見的一類食品檢測方法。與此同時,在食品安全檢測領域里,酶聯免疫分析檢測技術已得到了廣泛運用。該技術對酶學以及免疫方法進行了結合,并具有較高的準確性以及靈敏性。在對蔬菜和水果當中的菌劑噻菌靈進行檢測時,酶聯免疫分析檢測技術已顯示出了較好的敏感性。當前,美國化學會已將此方法納入到了農藥殘留檢測法當中,而在我國,該檢測方法也得到了廣泛運用,并取得了較好的效果。
2.4生物芯片檢測技術隨著全球化經濟的發展以及各國貿易的加強,進出口食品也在不斷增多。所以,為了對進出口食品進行有效檢測,就需運用到高質量、高安全的食品檢測技術以及安全監控體系。作為一類高新生物檢測技術,生物芯片檢測技術在進出口食品安全檢測工作中已得到了有效運用。該技術主要對光導原位合成進行了運用,可將大量的生物大分子按照一定順序進行固化。針對已經通過標記的待測生物樣品,該技術可對其中靶分子進行雜交,并運用特定設備對雜交信號的強度進行快速檢測,在對檢測儀器進行選取時,可優先選用電荷偶聯攝影像機,或是運用激光共聚焦完成掃描,進而統計出樣品中靶分子的數量。針對食品的安全狀態,運用生物芯片技術,我們可進行深入了解。另外,在進出口食品監管管理工作中,快速反應系統以及預警系統的建立完善都離不開生物芯片檢測技術。
2.5免疫法當前,在食品生物檢測技術中,免疫法具有最高的靈敏度。另外,該技術還具有容易操作、再現性好、科學可靠等優點,并在食品安全檢測工作中得到了有效運用。免疫法可對蛋白質進行檢測,蛋白質之間的物理性質以及化學性質差別較小,而運用免疫法則可進行有效區分。
2.6基因探針技術當前,基因探針技術主要分為兩種,即同相雜交以及異相雜交。在對食品安全進行檢測時,大腸桿菌檢測是一項重要內容。對大腸桿菌進行分析可知,其具有p一葡糖苷酸酶的特性,在進行檢測時,可對以B一葡糖苷酸酶為目標的DNA探針進行制作,使食品檢測工作的效率得到提升,并對傳統食品安全檢測工作中的問題進行有效解決。
3.食品檢測生物技術的具體運用
3.1檢測食品的品質和成分針對食品的成分以及品質,生物感應器是最為常見的檢測方法。在早期,所使用的生物感應器主要為葡萄糖感應器,可對食品的含糖量進行有效檢測,并得到了廣泛運用。例如,在對魚類新鮮度進行檢測時,日本已使生物傳感器實現了商品化。另外,針對食品中含有的香味物質,在進行檢測時還可運用到生物技術。具體的操作方法是:將蛋白和需進行檢測的某種氣味進行結合,使其成為敏感材料。對于人類身體健康以及生態環境,轉基因食品會帶來一定負面影響。所以,對轉基因食品進行檢測就變得尤為重要。當前,主要的檢測技術有蛋白質檢測、酶活性檢測以及有酸檢測三種。
3.2檢測食品中的有害微生物對科學有效的食品檢測技術進行運用,可使微生物的傳播得到較好控制。對于人類健康,食品中的微生物會帶來一定危害,并嚴重降低食品質量。因具有諸多優勢,在微生物的檢測工作中,生物檢測技術已取得了較好效果。當前,在對食品微生物進行檢測時,常用的生物技術主要有酶聯免疫技術、生物傳感技術以及合酶鏈式反應技術。
3.3檢測食品中的殘余農藥)隨著時代的發展,如何對食品中的殘余農藥進行有效檢測和分析已受到了人們的高度關注。倘若食品中殘留農藥,人民群眾的生命安全就會受到嚴重危害。當前,在食品殘余農藥檢測方面,主要運用的生物技術有酶技術以及生物傳感器。
4.結束語
選用光導原位合成方式及微量點樣方式進行生物芯片技術的應用。這種技術具有高通量、微型化及自動化的特點,生物芯片上大量高度集成的分子微陣列具有較高的密集型,可以通過較少的時間進行大規模生物分子分析,確保工作人員可以及時快捷地進行生物信息樣品的獲得,這種技術相比傳統檢測方式,其具有極高的效率。繼大規模集成電路后生物芯片將成為重要的科學技術革命。按照不同芯片上的固定探針,可以將生物芯片分為不同的種類,如基因芯片、蛋白質芯片等。按照生物芯片技術的工作原理,也可以將其分為不同的類型,如元件型微陣列芯片等?,F階段在環境監測中的水質控制、病原細菌瞬時檢測等方面生物芯片技術已經得到了廣泛地應用。目前生物芯片已經可以對公共飲用水內的微生物改變進行實時監測,RhodeIsland大學研發出可以對水中的沙門氏菌與大腸桿菌進行瞬時監測的一種生物芯片技術。細菌檢測與鑒定系統的建立可以通過DNA芯片進行,這種方式可以對細菌的種類、濃度進行及時監測,并通過將大量的寡核苷酸探針增添到芯片上可以增強本系統的精準度、擴展其檢測范圍及提高其鑒定能力。
2環境監測中生物傳感技術的應用
隨著科學技術的不斷進步及生物技術的快速發展,作為一個逐漸形成的新型科技領域,生物傳感器是一種具有特殊性的化學傳感器,是通過結合生物感應元件的專一性和一個能夠產生和待測物濃度成比例的信號傳導器的分析裝置。生物傳感技術的工作原理主要取決于生物敏感元件和待測物質之間的作用,利用這種方式,可以將待測對象沖電子組分內檢測出來并進行可測量電子信號的轉變。生物傳感技術具有以下幾個特點:第一,產生的生物學反應具有特異性及多樣性,因此可以進行全部生物物質檢測傳感器的制作;第二,這種技術相比其他生物技術,操作過程中無需進行試劑的添加,因此具有操作簡單、快捷及精確的特點,同時還可以進行多次應用;第三,這種技術可以進行不間斷地分析及聯機工作。環境監測水體內的BOD、有機磷、酶及NO3-。通過生物傳感技術進行BOD測定儀的制作,這件儀器可以對水中BOD含量進行直接測量。溶液、有機介質內的酶類化合物的件檢測可以通過酶電極安培傳感器進行準確檢測,生物催化劑可以通過不同的NO3-還原酶進行制作,水中NO3-含量的測定可以利用電流測量的生物傳感裝置進行測定。在環境監測中生物傳感技術也要進行大氣內二氧化碳、二氧化硫等含量與濃度進行分析。點位傳感器的制作可通過自養微生物與氧電極進行有效制作,起到多種離子、與揮發性酸的抗干擾作用,并對大氣環境內二氧化碳含量進行不間斷自動在線分析,這種技術具有較高的靈敏度。安培型生物傳感器的制作主要硫桿菌屬與氧電極進行有效制作,這種設備可以進行酸雨酸霧樣品內二氧化硫含量的檢測,微生物傳感器主要通過多孔氣體滲透膜、固定化硝化細菌及氧電極合成,可以對樣品內亞硝酸鈉含量進行測定。
3結束語
PCR技術是一種將特異性DN段在體外合成方法,也是聚合酶鏈式反應。通過PCR技術,環境中的有害生物,包括病毒,病原菌等都可以被監測到。過程主要包括分析與監測PCR擴增產物、PCR擴增靶序列、提取模板核酸等。不僅如此,環境中的特異性種群也都可以通過PCR進行監測,甚至基因表達都可以以之來測定。同時,PCR也可以用來對環境中基因工程菌株進行跟蹤監測。
2生物發光監測技術
大自然非常神奇,各種各樣的生物都有。而在其中有些昆蟲會發出亮光,比如螢火蟲。其實不止螢火蟲等昆蟲,包括真菌、細菌等在內的許多生物也都可以發出亮光。這些細菌天生對土壤中的重金屬敏感,會根據重金屬的多少而發出強弱程度不同的光。只需要通過判斷其放射熒光的強度便可以對其所處環境的污染程度完成監測。較之常規監測方法,生物發光監測技術具有監測方便、快速、特異性強、靈敏度高等特點。
3生物酶技術
3.1處理功效高
生物酶技術利用微生物和酶結合,極大地提高了其處理污染的效率,較之通常的化學和生物方法,生物酶技術可對有機物進行快速降解,速度得到極大提升,是傳統方法的百倍。將生物酶技術應用到污染物之后,可迅速祛除污染物的臭味,同時也能對水質進行凈化處理,甚而降低COD、BOD5、氨、氮等的含量。這也是有些洗衣粉品牌在廣告語中強調酶含量的原因所在。
3.2適應性更廣
生物酶技術通過微生物和酶的結合,大幅度增加了微生物對環境的適應性,使得微生物可以在多種生存條件下得以生存并逐漸適應多種溫度和pH值范圍。如此一來,微生物便可以在低氧環境中也能有效發揮作用。
3.3更有針對性
生物酶技術現在擁有多個研究配方,甚至多達四十多種??稍诓煌I域、不同用途和不同的污染環境中廣泛使用;即使碰上處理不了的,也可根據具體治理對象的具體情況,專門研發出針對性的、最具效力的配方。
3.4治理成本最低
生物酶技術產品投入資本小,但治理效果卻十分顯著。無需花高價購買地皮建廠,也不必購置大型儀器,在綜合治理成本上有著明顯優勢,非常值得采用。
3.5純綠色環保
當今環保意識已逐漸滲透到每個人們的心中,綠色產品成為人們普遍關注的焦點。而生物酶技術產品由純天然菌種和酶復合后生成,在它的成分內既無轉基因,也不包含任何的化學物質,也自不會給環境造成二次污染,是一種生物技術在環境保護應用上非常值得大力推廣的環測方法。
4生物芯片技術
生物芯片技術起源于速測試試條發明后的次年,亦即1995年,通過這項技術,數以萬計的基因的表達情形都可以被自動且迅速地監測出來。依照固定于芯片上的探針種類的不同,生物芯片可分為基因芯片、蛋白芯片、細胞芯片以及組織芯片等。近日,國外的一個資深生物學家通過不斷研究,發明了一種新的,獨特的,可提供更多基因信息的組織芯片和細胞芯片。較之基因芯片或蛋白芯片,組織芯片可提供的信息更為龐雜,對于環境監測而言更為有用。因此許多環境科學家逐漸意識到了生物芯片技術的強大,并將之引入到環境科學研究中來。在科學技術較為發達的西方國家,他們基因學研究的新趨向便是基于生物芯片技術的環境基因學。作為科學技術稍顯落后的我國,在生物芯片研究上成果并不那么突出。好在國家自然基金委與科技部都對這項新興技術予以大力支持,并將之列入了前沿課題項目中,相信在不久的將來,我國的生物芯片技術也會取得非常成就。
5生物傳感器技術
電子科技技術研發的不斷深入、以及生物技術的研究的持續發力,使得生物傳感技術應運而生,并獲得人們的逐漸認可。它的特點在于高度集成化、微型化和自動化,能夠快而有效地幫助環境監測進行有害物質分析。不僅常被用于環境監測,在食品工業與生物醫藥領域也都應用廣泛。生物傳感器通常由轉換器和敏感材料(分子識別單元)倆個部分構成,其特點為:測定速度快、成本低、且操作簡便。相信在未來會被廣泛應用于環境監測中去,會大有所為。
6結語
關鍵詞:培養基質量控制微生物檢測
中圖分類號:R37文獻標識碼:A文章編號:1672-5085(2007)12-0098-03
培養基是液體、半固體或固體形式的,含天然或合成成分,用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環節,培養基自身質量的優劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。本文對微生物實驗室在培養基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論,談一些觀點和看法。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。
1培養基的購置與驗收
1.1購置
從培養基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異[1]。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養基的供應企業進行評價后選擇合格的供應商,這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業提供:培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料[2]。
1.2驗收
購買的培養基到貨后,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨物后都應對培養基的質量進行檢測,滿足檢測方法規定的要求后方可投入使用。
2培養基的儲存
干粉培養基應保存在陰涼干燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養基在室溫下的最長保存2年,開瓶后的干粉培養基易吸濕,應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查,如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
3培養基的制備
3.1培養基用水
培養基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水[2]。。
3.2稱量
稱量時要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
3.3復水
復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞,并可產生有毒物質,如發現焦化,或未溶解均勻前培養基有溢出,該培養基即不能使用,應重新制備。對于瓊脂類培養基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養基應棄去。
3.4滅菌
一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃15min,含糖或特殊培養基,按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配制好的培養基必須立即滅菌,避免微生物生長繁殖而消耗養分,改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營養成分,還會使瓊脂的凝膠強度下降,因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間,并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。
3.5pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值,即培養基使用前的pH,并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/LNa0H或lmol/LHCL調整,注意不可反復調pH,否則會影響培養基的滲透壓[3]。
3.6配制好的培養基保存
滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配制的培養基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發[4]。
4培養基的性能測試
4.1外觀控制
制備好的培養基應有相應的顏色,一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,是否蒸發/脫水。
4.2污染控制
從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。
4.3性能測試
4.3.1測試菌株選擇測試菌株是具有其代表種的穩定特性并能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株,應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株[5],菌株的選擇參考衛生行業標準WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。
4.3.2定量測試方法改良Miles-Misra法測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區域并標記;從最高稀釋度開始,分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區域;將稀釋液涂滿整個1/4區域,37°C培養18小時;對易計數的區域計數,按公式計算生長率(生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.7,該類培養基應易于目標菌生長;選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.1[6]。
4.3.3半定量測試方法改進的劃線法接種法平板分ABCD四區,共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分,分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長,而非目標菌的生長應部分或完全被抑制,目標菌的生長指數G大于6時,培養基可接受[6]。
4.3.4定性測試方法平板接種觀察法用接種環取測試菌培養物,在測試培養基表面劃平行直線。按標準中規定的培養時間和溫度對接種后的平板進行培養,目標菌應呈現良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長[6]。
5討論
培養基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環節的質量問題,都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此,加強培養基的實驗室質量控制,認真地做好培養基的質控工作,不斷完善和提高培養基的質控水平,才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養基。
參考文獻
[1]唐細良,史娟,唐紫琳,等.影響衛生微生物檢驗質量的兩個因素研究[J].實用預防醫學,2000,7(4):314-315.
[2]ISO/TS11133-1:2000.Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs-Guidelinesonpreparationandproductionofculturemedia-Part1:Generalguidelinesonqualityassurancefortheprepatationofculturemediainthelaboratory[S].
[3]劉春梅,蔡芷荷,吳清平.食品衛生微生物檢驗中培養基的質量控制[J].中國衛生檢驗雜志,2007,17(4):700-701.
[4]饒紅,陳廣全,馮騫,等.微生物實驗室培養基的質量保證措施[J].檢驗檢疫科學,2006,6(4):31-33.