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序論：在您撰寫基因工程疫苗時，參考他人的優秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發您的創作熱情，引導您走向新的創作高度。
戊肝疫苗研制
基因工程疫苗是用基因工程方法或分子克隆技術，分離出病原的保護性抗原基因，將其轉入原核或真核系統使表達出該病原的保護性抗原，制成疫苗，或者將病原的毒力相關基因刪除掉，使成為不帶毒力相關基因的基因缺失苗。包括多肽或亞單位疫苗、顆粒載體疫苗、病毒活載體疫苗、細菌活載體疫苗、基因重配疫苗以及基因缺失疫苗如乙肝疫苗等。
2012年1月11日——一個原本并不特殊的日子，卻因一份捷報而注定要被載入史冊?？萍疾吭谶@一天宣布：由廈門大學和養生堂萬泰公司聯合研制的“重組戊型肝炎疫苗（大腸埃希菌）”已獲得國家一類新藥證書和生產文號，成為世界上第一個用于預防戊型肝炎的疫苗。
這是50年來，人類在經受了10余次萬人以上的戊肝重大疫情后等來的一份捷報。
14年“磨”出世界第一
戊肝疫苗的成功研發，標志著我國在生物制藥原始創新領域取得重大突破，它的面世讓中國在基因工程病毒疫苗的原始創新上實現了零的突破。11.3萬人、30余萬針次的研究顯示，該疫苗具有良好的安全性和保護性。
2月28日，疫苗研發團隊的核心成員——廈門大學國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心主任夏寧邵教授，在接受科技日報記者采訪時表示：“重組戊肝疫苗是迄今唯一使用大腸桿菌表達系統研制的病毒疫苗。它的成功研制扭轉了國際醫藥界中‘原核系統不能用于病毒疫苗研制’的傳統認識?！?/p>
“傳統的疫苗研制方法主要有兩種途徑。一種是將病毒放在細胞內進行大量培養、滅活，再輔以佐劑，用這種方法制成的疫苗叫滅活疫苗；第二種是將病原體在體外反復傳代，去除其致病性，但保留其免疫原性，用這種方法制成的疫苗叫減毒活疫苗。而我們這次是采用的基因工程技術。” 夏寧邵告訴記者，“與傳統滅活疫苗和減毒活疫苗比較，基因工程疫苗的研發不依賴于病原體的培養，因此對于大量尚未建立成熟體外培養技術的病原體也能進行疫苗的研制。在生產過程中，基因工程疫苗完全不涉及病原體，消除了由于病原體滅活不徹底或減毒不完全導致的安全性問題。不僅如此，基因工程疫苗的研發還可通過精心設計的純化過程實現對生產過程中伴隨的各類雜質的高效清除和殘余成分的高度可控，降低了由于雜質導致的各類接種副反應的風險，提高了疫苗的安全性和耐受性，同時還能提高不同疫苗生產批次間的均一性?！?/p>
從1998年開始，時任國家試劑與疫苗中心主任、廈門大學公共衛生學院院長的夏寧邵便帶領著他的團隊，著手進行戊肝疫苗的研發。與所有的新藥研發一樣，重組戊肝疫苗的研發并非一路坦途。
歷經14年艱苦研發，由廈門大學國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心和企業的200余名科研人員組成的課題組，在基礎研究領域、應用基礎研究領域和應用研究領域，取得了保護性抗原識別及結構表征、病毒顆粒組裝機制等多項發現成果，并突破了原核表達類病毒顆粒、高效純化及體外自組裝等一系列關鍵技術障礙，創建出具有多項全球自主知識產權的核心技術體系。
夏寧邵告訴記者，該體系的關鍵技術已在14個主要國家申請了12項發明專利，對我國發展具有自主知識產權的創新疫苗并高起點地參與國際競爭具有深遠意義?；谠擉w系關鍵技術，團隊研制的另一個疫苗“人瘤病毒16/18型二價疫苗”（宮頸癌疫苗）已經打破了美英技術封鎖成為全球第3個、國內第1個獲準進行臨床試驗的宮頸癌疫苗，目前已基本完成Ⅱ期臨床試驗，初步結果顯示該疫苗安全并能刺激人體產生高滴度抗體。
夏寧邵說：“戊肝疫苗是國家工程的成果，也是產學研協同創新的成果?！边@份30微克的戊肝疫苗，不僅見證著研發人員的辛勞，同時也記錄著我國重大科技專項自主創新的步伐：自2005年起，國家863計劃開始對戊肝疫苗項目進行支持，有效地帶動了地方、企業投入研發資金近5億元，其臨床研究也被列入“十一五”863計劃重大項目中，這為課題組在國內外率先研制成功戊型肝炎疫苗提供了重要支撐。
談及疫苗研發的前景，夏寧邵顯得信心滿懷。他的信心來自于國家對這個產業的大力支持：2007年，國家將生物醫藥確定為“十二五”期間重點發展的戰略性新興產業，尤其是用于應對突發生物事件的疫苗及免疫佐劑等還被列入了公共安全領域生物安全保障方面的優先發展主題。
現階段疫苗研發應以集成創新為主
作為全國政協委員，中國食品藥品檢定研究院菌種室主任王國治一直關注著疫苗領域的發展。對夏寧邵團隊所取得的成功，他難掩心中的喜悅和激動：“我國能在世界上第一個研發出戊肝疫苗確實非常令人振奮！”
但就國內疫苗研發的整體水平，王國治直言不諱：“我國在疫苗研發領域的基礎研究力量還比較薄弱，十個研發有九個都出不了結果。而國家又太過于強調疫苗研發的完全自主知識產權，這與我國目前的疫苗研發水平不相符合?！?/p>
“中國的疫苗研發，前期工作幾乎都是由大專院校的研究生在做，其可信度和創新性都不夠，后期工作也往往跟不上。多數人的研究都以仿制為主，盡管拿了專利，出了蛋白，但真正要作出成果卻很難，常常是實驗完了，出來一大堆報廢產品?！蓖鯂握J為，針對我國在疫苗領域現有的研發水平，“在引進國外成熟技術的基礎上進行整合創新、集成創新才是這個階段的重點?！?/p>
王國治在考察了發達國家的疫苗生產企業后發現：在疫苗研發上，中國缺的不是硬件，也不是錢，缺的是技術和管理規范。中國對疫苗生產企業的硬件要求比國外更嚴格，可在軟件方面比如管理規范上卻放得比較寬。而事實上，疫苗生產過程中，后期主要是規范性管理的問題。
在王國治看來，目前整個疫苗產業還缺少一種系統的協作。他認為，“這與國家在疫苗研發領域和產業規劃上缺乏一種整體的頂層設計有關?！?/p>
王國治告訴記者，受多種因素制約，國家免疫規劃疫苗政府定價總體水平偏低，利潤空間較小，以一支重組蛋白類的乙肝疫苗為例，國家定價只有3塊多錢每人次，這在一定程度上影響了企業提高產品質量和進行產品升級換代的積極性。而第二類疫苗為市場調節價格產品，流通環節較多，市場價格偏高。
“疫苗產業是關系國計民生的朝陽產業?！睂Υ?，王國治建議，國家在制定產業發展策略時，應當充分考慮產業自身的特點和不同的發展背景。在投入上，對與老百姓生命利益息息相關的和研發成本高、失敗風險大的一類疫苗，以及共患病的疫苗，國家應當加大扶持力度，而對具有良好發展前景和自主知識產權的二類疫苗，則應當以引導企業生產為主。
加大投入優先發展疫苗產業
對疫苗產業的明天充滿同樣期待的，還有全球第一支甲流疫苗的生產企業——北京科興生物制品有限公司的總經理尹衛東。
在甲流肆虐的2009年，尹衛東帶領著自己的員工在短短的87天中成功生產出全世界第一支甲流疫苗。在他看來，接種疫苗不但是保護自己的一種措施，同時也是保護他人的一種手段。
“然而目前，人們對接種疫苗的社會認知度卻還遠遠不夠?！币l東舉例說，為了減少老年人群因流感并發癥帶來的死亡，北京市政府每年都為60歲以上的老人免費接種流感疫苗，然而卻只有約50%的老年人進行了自愿接種。
“如果能讓老年人接種流感疫苗的百分比從現在的50%提高到80%，老年人因老年病和流感造成的死亡率就會有所降低，這樣，實現‘十二五’期間將我國人均壽命提高1歲的目標就會立竿見影。”尹衛東說，“但如果沒有疫苗產業的發展就提供不了這樣的服務。疫苗產業不僅具有技術高附加值的特性，而且還能節省資源和能源，對整個經濟社會的發展具有保駕護航的作用，應該得到優先發展。”
[關鍵詞]基因工程疫苗 核酸疫苗 免疫
[中圖分類號]Q789-01 [文獻標識碼]A [文章編號]1009-5349（2014）11-0081-01
自Edward Jenne醫生發明天花疫苗開始，已有幾千種疫苗被開發出來，疫苗逐漸成為人類與疾病做斗爭的重要武器之一。傳統疫苗具有生產的成本高、疫苗中含強毒性致病物質、減毒株突變及部分疾病用傳統的疫苗防治收效甚微等缺點。所以，研制更安全、更高效的疫苗十分必要。
DNA重組技術為新一代疫苗――基因工程疫苗的研制提供了全新的方法?；蚬こ桃呙缡侵笐肈NA重組技術，通過基因組改造，降低病原微生物的致病性，提高免疫原性，進而達到防治傳染病的目的。迄今為止，基因工程疫苗是最先進的疫苗，相比傳統疫苗而言它有巨大的優勢。
一、基因工程疫苗種類
應用基因工程技術開發的已經使用和正在研制的新型疫苗種類主要有基因工程亞單位疫苗、基因工程活載體疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗、轉基因植物可食疫苗等。
（一）基因工程亞單位疫苗
該類疫苗僅包含病原體的抗原，不包含病原體的其他遺傳信息?；蚬こ虂唵挝灰呙缤ㄟ^表達病毒的主要保護性抗原蛋白獲得免疫原性，具有安全、便于規?；a等優點。該類疫苗的制備步驟如下：①了解編碼具有免疫原活性的抗原蛋白對應的基因信息。②從大腸埃希氏菌、酵母、轉基因動植物等表達系統中選擇最適表達載體。如：酵母表達系統已經大規模生產人用重組肝炎疫苗?；蚬こ虂唵挝灰呙缈杉毞譃椋杭毦约膊?、病毒性疾病和激素亞單位疫苗。
1.細菌性疾病亞單位疫苗
分離和鑒定致病菌主要免疫原和毒力因子是研究細菌性亞單位疫苗的基礎，目前已研制出與炭疽、大腸桿菌病、牛布魯氏菌病等對應的亞單位疫苗，均能對相應的疾病產生有效的保護作用。史百芬等發現RSVF蛋白亞單位疫苗（PFP-1）注射接種后接種者無呼吸道疾病加劇作用。
2.病毒性疾病亞單位疫苗
大多數病毒基因組已經被克隆和完全測序，因此病毒性亞單位疫苗的研制相對簡單。現在病毒性疾病亞單位疫苗主要有口蹄疫、狂犬病、乙肝疫苗等。中國臺灣省科學家研制的禽流感亞單位疫苗效力遠比滅活疫苗高。祁賢等應用酵母系統表達生產雞傳染性腔上囊病病毒VP2亞單位疫苗，發現其可完全取代傳統滅活疫苗。
3.激素亞單位疫苗
該疫苗是以生長抑制素為免疫原的一類疫苗。杜念興等將大腸埃希氏菌中表達的生長抑制素基因與HbsAg基因融合，通過Vero細胞表達，結果發現表達產物具有良好的免疫原性。杜念興等用SS基因疫苗免疫小鼠，發現口服型SS基因疫苗免疫小鼠后可在小腸表達HBsAg/SS融合蛋白，推測該基因疫苗刺激機體表達蛋白后能產生SS抗體。
（二）基因工程活載體疫苗
此類疫苗生產主要有兩種方法，一是使非致病性微生物表達某種特定病原物的抗原決定簇基因，進而產生免疫原性，另一種是致病性微生物被修飾或去掉毒性基因，但仍保持免疫原性?；钶d體疫苗結合了活疫苗和死疫苗的共同優點，在免疫力上具有很大的優勢，分復制性和基因突變活載體疫苗。
（三）核酸疫苗
核酸疫苗接種后，抗原合成、增加與病原自然感染十分相似;還具有免疫原性單一;易構建和制備，穩定性好，成本低廉，適于規?；a等優點。
二、展望
疫苗開發具有安全性、有效性、價廉性、易推廣性等特點?；蚬こ桃呙缇哂袀鹘y疫苗無可比擬的優點，是疫苗產品開發的主要方向。研制多聯或多價疫苗是基因工程疫苗的主要發展方向。
【參考文獻】
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關鍵詞：植物疫苗；基因工程；表達系統；安全性
1 植物疫苗的免疫原理
植物疫苗可誘導粘膜免疫反應，小腸淋巴組織的粘膜上有一種特殊的細胞叫做膜細胞（M 細胞）。粘膜免疫應答就是由M 細胞識別抗原開始的。M細胞識別抗原并將其傳遞給巨噬細胞，巨噬細胞和其它抗原呈遞細胞，再將抗原展示給輔T細胞，輔T細胞識別外源蛋白質片段后就會刺激B細胞制造和釋放能中和抗原的抗體，當疾病因子出現時，記憶輔T細胞刺激胞毒T 細胞攻擊受感染的細胞，同時它迅速刺激記憶B 細胞分泌中和抗體消滅入侵的病原體?？偟膩碚f，轉基因植物疫苗可以誘導相應的血清型的IgA 和IgG 反應。
2 植物疫苗的特點
2.1 安全性高
植物是人類食物來源之一，除個別人群對某些特定的植物過敏外，其安全性高。用動物細胞生產疫苗，可能有動物病毒的污染，對人類存在潛在危害。而植物病毒不會感染人類，比較安全，同時也可避免微生物生產疫苗帶來的有害產物。
2.2 成本低
植物種植系統簡單易行，植物細胞培養條件簡單，便于進行遺傳操作，可通過大面積栽培獲得廉價的疫苗，且不需要技術、設備和種植條件等巨大投資。農作物可以當地生產，還易于儲藏和運輸，而且經過長期種植，植物栽培、收獲、貯藏、加工程序已經形成工業化。與植物生物反應器相比，原核生物反應器與動物生物反應器生產時需要昂貴的技術設備、大量的人力物力。
2.3 植物具有完整的真核表達系統
具有與動物相同的真核加工修飾系統?？梢詫χ亟M蛋白進行糖基化、磷酸化、酰胺化、亞基正確裝配等。微生物系統不能對真核生物蛋白進行正確的翻譯后加工。
2.4 轉基因植物中的外源基因可重組
通過植物雜交的方法進行基因重組，進而在植物體內積累多種病原體的抗原基因，生產出方便高效的多聯疫苗。
3 植物基因工程疫苗外源基因的表達系統
3.1 瞬時表達系統
主要采用植物病毒作為載體，而外源基因插入到病毒基因組中，通過病毒感染植株，從而將外源基因導入植物細胞內，采用這種轉化方式，外源基因并不整合至植物基因組中，只是利用寄主細胞在細胞質中進行復制，以高拷貝的形式游離于植物中，并進行高效的表達，因此可在短時間內在植物細胞內積累大量的外源蛋白。采用農桿菌介導的轉化，外源基因蛋白的產量一般要低于細胞內可溶性蛋白總量的1%；而采用這種瞬時表達系統,外源基因蛋白總量會遠大于1%。
3.2 穩定整合系統
3.2.1 土壤農桿菌介導的遺傳轉化。目前根癌農桿菌主要用于雙子葉植物的遺傳轉化，其轉化植物的機制已從分子水平上基本得到解釋。而發根農桿菌，由于對Ri 質粒了解得還不充分，所以對這種轉化系統的研究主要集中在以生產次生代謝產物為目的的根組織培養和根的發育。采用農桿菌介導的植物轉化最常采用共培養法，即使用農桿菌菌液與葉盤、愈傷組織、懸浮培養細胞、莖段、下胚軸段、子葉切片等部分進行共培養，從而達到轉化的目的。
3.2.2 外源DNA 直接導入法。主要包括基因槍法、電激發、PEG誘導法、激光穿孔法、脂質體法、超聲波法，其中最常用的是基因槍法。它是將帶有外源基因的質粒用亞精胺包裹為直徑1μm 左右的金彈或鎢彈，再用高壓氦氣、火藥爆炸力、高壓放電氣體作為動力加速子彈，使它們穿過植物細胞壁和細胞膜，將外源基因帶入具有再生能力的植物組織，這樣可以在很大程度上縮短再生的時間，從而避免體細胞變異的發生。
4 以植物為載體的免疫技術
4.1 植物疫苗免疫原性和免疫保護作用
由于植物疫苗一般是通過食用來被人體利用。所以如何避免消化酶的影響來保護抗原就是一個重要的研究課題。目前，避免消化酶的影響來保護抗原可分為2類方法：①用沙門氏菌和弧狀霍亂桿菌作為載體；②用保護性的包被對抗原進行包裝。
用減毒的菌株可以把抗原引向粘膜的表面，有利于粘膜免疫系統攝取所表達的抗原。但是基于減毒菌株的方法具有潛在安全缺陷，而后者可通過生物降解的多聚物、脂質體、蛋白質體或者表達抗原的轉基因植物來實現。許多研究表明，植物材料可潛在地保護所選定的抗原。特別在種子中，植物可為亞單位疫苗提供一個富含蛋白酶抑制物的糖類聚合物基質環境。其它的抗原包裝方法需要煩瑣的處理步驟；而通過植物種子來進行生物包裝不需要任何額外的代價，就可以為這些抗原提供保護。在有關轉基因馬鈴薯的研究中，從輪狀病毒和產腸毒素大腸桿菌中所選的抗原分別與霍亂毒素的B和A2亞單位融合，抗原的免疫反應顯示出對Th1的偏愛性，并可誘導白細胞介素2和干擾素γ，CD4 + 水平也相應增加。Th1的偏愛性很可能是抗原或者載體的選擇結果。在佐劑的幫助下，亞單位疫苗的釋放能增加免疫反應量?；魜y毒素和大腸桿菌的熱不穩定毒素，它們與抗原共表達，有利于誘導保護性的免疫產生，改變口服免疫低效率遞呈。另外，有人證實了轉基因植物疫苗的粘膜傳輸中所誘發的免疫應答所具有的黏膜佐劑的特征，這給口服免疫可不需佐劑提供了依據，同時也提高了其安全性。
在以植物疫苗的口服免疫研究中，所候選的亞單位疫苗也具有較好的保護作用。馬鈴薯塊莖或谷物種子中表達的熱不穩定毒素的B 亞基和馬鈴薯中表達的霍亂毒素B 亞基用于小鼠口服免疫，可以保護老鼠免受痢疾的感染。另外，口服免疫由谷物種子表達的傳播性腸炎病毒的S2糖蛋白，對乳豬能夠起到很好的保護作用。目前，通過植物遞送系統來生產B 型肝炎的疫苗也逐漸成熟。
4.2 提高抗原在植物中的表達水平
利用植物進行疫苗開發，首要的問題是，植物能否表達相關的蛋白？目前為止，許多亞單位候選抗原在轉基因植物中成功表達，這些抗原主要包括感染人類、家畜、野生動物的細菌和病毒抗原。表達水平很大程度上取決于表達的蛋白和用于表達的植物種類，同時，構建的表達系統也影響抗原的表達水平，比如用于表達的細胞器基因組(核和質粒)、啟動子的強度和組織專一性、非翻譯前導序列和信號序列的選擇和表達蛋白的靶細胞器的定位等均對表達產生影響。一般而言，利用上述策略可以實現抗原高水平表達。然而，很難對表達系統進行比較，因為特定抗原對植物表達系統的選擇很重要，在不同的系統中其表達效果是不一樣的。近來，研究人員利用內質網滯留信號可提高外源基因的表達量，Mason等利用一個核表達系統，把蛋白定位于內質網滯留信號之后，熱不穩定毒素B亞單位在馬玲薯塊莖中表達量可達總可溶性蛋白質的0.2% ；在谷物種子中的表達量約占總可溶蛋白的4%或12% ，這些都依賴于所用的調節序列。另外，霍亂毒素（B）亞單位在利用內質網滯留信號時在煙草葉片中的表達量約占總可溶蛋白的4%。膜蛋白比可溶性蛋白更難于在轉基因植物中表達，大量研究表明，膜蛋白在植物中的表達量遠不及可溶性蛋白，這就需要優化表達系統以提高表達水平。
目前，轉基因馬玲薯表達B型肝炎的表面抗原水平已由馬玲薯大約1mg/g增加到馬玲薯大約16mg/g抗原，這樣可以大大減少口服劑量。目前許多研究表明，所欲表達的抗原在植物中能夠表達并裝配成四級結構。糖基化修飾的蛋白也可在植物中進行糖基化，盡管糖基化模式很可能存在著差別。在植物系統中表達的熱不穩定蛋白毒素的B亞單位和霍亂毒素的B亞單位，均有GM1受體結合活性，B型肝炎表面抗原和諾沃克病毒衣殼蛋白可形成類病毒顆粒，類病毒顆粒的形成，可認為有利于誘導免疫反應。
5 植物基因工程疫苗研究進展
5.1 反轉錄病毒載體
反轉錄病毒作為載體是在進行動物基因工程中發現的，許多研究人員認為它同樣適于植物基因工程，但目前研究的不多。
5.2 單鏈RNA植物病毒
單鏈RNA 植物病毒，即病毒RNA可直接作為mRNA的植物病毒，主要包括苜?；ㄈ~病毒(ALMV)、豇豆花葉病毒(CPMV)、雀麥花葉病毒(BMV)、煙草花葉病毒(TMV)等。它們作為外源基因載體主要通過以下步驟感染植物：病毒RNA 首先反轉錄為一條單鏈cDNA，在DNA聚合酶作用下形成雙鏈DNA，將其克隆入細菌質粒中，將外源基因插入質粒的cDNA中，最后通過體外轉錄，用帶有外源基因的RNA病毒感染植物，將其轉入植物細胞。
5.3單鏈DNA植物病毒載體
在單鏈DNA 植物病毒載體中，研究最多的是Geminiviruses(簡稱GeNV) ，又叫做雙粒病毒或雙聯體病毒。它一般含有2個成對并存的病毒顆粒，大小約為18～20nm，遺傳物質是單鏈DNA ,每2個顆粒中包含1～2個、2. 5～3.0 kb的環狀DNA分子。該病毒寄主廣泛，單子葉植物和雙子葉植物均可被感染，但感染部位僅限于植物的維管組織，且其傳播媒介主要是昆蟲，不能通過機械接種。
5.4 雙鏈DNA植物病毒載體
雙鏈DNA植物病毒載體中最典型的是花椰菜花葉病毒，它的基因組長約8kb，主要感染花椰菜、油菜、擬南芥等，主要寄主是蕓苔屬植物，目前尚未發現可感染豆科和單子葉植物。
6 植物疫苗的安全性
6.1 對環境的影響
由于在植物疫苗中包含了病原體的DN段，因而花粉和種子的散播造成的基因逃逸可能給人類帶來新的病原、毒素、過敏原等，因此對可能引起的基因漸滲現象必須做出充分的安全性評價,并規范植物疫苗的利用和管理，同時尋求技術方法。如可恢復阻塞(RBF)技術，它能使自然界中因漸滲而攜帶RBF 的雜種或近緣系植物死亡或不育或利用葉綠體轉化植物疫苗或培育植物疫苗的雄性不育系，這樣就可避免花粉傳播而帶來的潛在威脅，轉基因植物疫苗有著傳統疫苗無法比擬的優越性，已經成為一個研究熱點了。未來的研究應著眼于生產出作為醫藥商品的安全、可靠、有效的植物疫苗。轉基因植物疫苗應用最大的限制就是表達量低?，F在的研究表明：可以通過葉綠體轉化、植物育種和利用食品加工技術來提高表達水平，而且研究還指出，運用攜帶蛋白和輔助蛋白可以增加抗原被免疫系統識別的能力。這些研究都使我們越來越接近生產出廉價“安全口服的商品植物疫苗”，這樣的疫苗將可以幫助人們預防疾病的傳播。
6.2對人類和動物的影響
抗生素抗性基因是篩選轉基因植物常用的標記基因。長期食用這類轉基因疫苗是否會對人體或動物造成抗生素醫療無效。轉基因植物中的新基因會不會傳遞給人畜腸道的正常微生物，引起菌群和數量的變化或插入并表達，從而危害人畜健康？這些問題目前都無法解答，仍需大量學者繼續研究論證。
7 展望
利用植物來表達和遞送疫苗技術的發展給免疫研究注入了新的內容。以往的研究中,在植物中表達了包括過濾性病毒、細菌、腸道和非腸道的病原體等各種不同的抗原，并做了相應免疫學研究。但植物疫苗面臨的最大問題是抗原蛋白在植物細胞表達量不高，低劑量抗原蛋白往往不能激發足夠的免疫反應，這不能僅靠增加植物組織攝取量得以解決，因為低劑量的重復免疫可能會導致機體的免疫耐受，導致機體對此抗原免疫反應保持“低調”，即使以后增加抗原蛋白的劑量也不能改變。另外，機體每天對植物組織的攝取量是一定的，不可能無限增加。因此，未來研究的重點之一是提高植物疫苗中抗原蛋白的表達量。隨著生物技術的發展和植物基因工程研究的深入，基于植物的疫苗遞送系統將更具吸引力，并呈現出廣闊的應用前景。
參考文獻
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摘要：為研究鵝細小病毒（GPV）VP2蛋白基因工程亞單位疫苗對實驗動物的免疫效果，本試驗對GPV延邊分離株的vp2基因進行原核表達，將Western-blot試驗鑒定為陽性的表達蛋白進行乳化，免疫BALB/c小鼠，應用ELISA方法監測試驗動物的體液免疫水平，以此評價該疫苗的免疫效果。結果表明，在三免后2d，重組蛋白佐劑組檢測到的血清OD450nm值達0.687，而生理鹽水陰性對照組為0.038，兩者差異極顯著（P
關鍵詞：鵝細小病毒；基因工程亞單位疫苗；免疫試驗
關鍵詞：鵝細小病毒；基因工程亞單位疫苗；免疫試驗
中圖分類號：S835 文獻標識碼：A 文章編號：1674-0432（2012）-01-0171-1
中圖分類號：S835 文獻標識碼：A 文章編號：1674-0432（2012）-01-0171-1
基金項目：吉林省自然科學基金面上項目（201215230），吉林省牧業管理局項目(吉牧科字第200902號)。
基金項目：吉林省自然科學基金面上項目（201215230），吉林省牧業管理局項目(吉牧科字第200902號)。
細小病毒（Goose Parvovirusis，GP）呈世界性分布，發病率和病死率均較高，臨床一旦發病，無有效的治療辦法，嚴重危害本地區養鵝業的健康發展[1]。目前，國內外用于GP的預防主要以傳統疫苗為主，基因工程疫苗尚屬探索階段，尚缺乏GPV基因工程疫苗誘導雛鵝細胞免疫和體液免疫的系統研究資料。在GPV的三個結構基因中，Le Gall-Recule等[2]利用桿狀病毒表達系統，證明表達的番鴨細小病毒vp2基因具有抗原性和免疫原性。本研究擬對GPV的vp2基因進行原核表達，制備基因工程亞單位疫苗，并進行免疫試驗分析，為GPV的vp2基因工程疫苗的研制奠定基礎。
細小病毒（Goose Parvovirusis，GP）呈世界性分布，發病率和病死率均較高，臨床一旦發病，無有效的治療辦法，嚴重危害本地區養鵝業的健康發展[1]。目前，國內外用于GP的預防主要以傳統疫苗為主，基因工程疫苗尚屬探索階段，尚缺乏GPV基因工程疫苗誘導雛鵝細胞免疫和體液免疫的系統研究資料。在GPV的三個結構基因中，Le Gall-Recule等[2]利用桿狀病毒表達系統，證明表達的番鴨細小病毒vp2基因具有抗原性和免疫原性。本研究擬對GPV的vp2基因進行原核表達，制備基因工程亞單位疫苗，并進行免疫試驗分析，為GPV的vp2基因工程疫苗的研制奠定基礎。
1 材料與方法
1 材料與方法
1.1 材料
1.1 材料
BALB/c小鼠購自哈爾濱獸醫研究所；弗氏佐劑購自sigma公司；其他載體與試劑由延邊大學預防獸醫實驗室提供。
BALB/c小鼠購自哈爾濱獸醫研究所；弗氏佐劑購自sigma公司；其他載體與試劑由延邊大學預防獸醫實驗室提供。
1.2 GPV延邊株vp2基因工程亞單位疫苗的制備
1.2 GPV延邊株vp2基因工程亞單位疫苗的制備
采用常規方法提取GPV延邊株的基因組DNA，以特異引物[3]擴增vp2基因片段，構建原核表達載體pET30a-vp2，并在大腸桿菌中誘導表達，將Western-blot鑒定為陽性的蛋白進行親和層析純化，純化后重組蛋白與弗氏佐劑混合乳化，制備GPV的基因工程亞單位疫苗。
采用常規方法提取GPV延邊株的基因組DNA，以特異引物[3]擴增vp2基因片段，構建原核表達載體pET30a-vp2，并在大腸桿菌中誘導表達，將Western-blot鑒定為陽性的蛋白進行親和層析純化，純化后重組蛋白與弗氏佐劑混合乳化，制備GPV的基因工程亞單位疫苗。
1.3 vp2基因工程亞單位疫苗的動物免疫試驗
1.3 vp2基因工程亞單位疫苗的動物免疫試驗
免疫試驗共分3組，每組10只BALB/c小鼠，分別為接種VP2重組蛋白組，VP2重組蛋白加佐劑組和生理鹽水對照組。在每一次免疫前采血分離血清，第3次免疫后的第2d、4d、6d分別采血分離血清，均存于-20℃備用。
免疫試驗共分3組，每組10只BALB/c小鼠，分別為接種VP2重組蛋白組，VP2重組蛋白加佐劑組和生理鹽水對照組。在每一次免疫前采血分離血清，第3次免疫后的第2d、4d、6d分別采血分離血清，均存于-20℃備用。
1.4 ELISA監測血清VP2抗體水平
1.4 ELISA監測血清VP2抗體水平
用純化的VP2重組蛋白為抗原包被反應孔，以小鼠抗GPV陽性血清為一抗，以山羊抗小鼠HRP-IgG為二抗，進行ELISA檢測實驗小鼠血清中抗體水平，并分析vp2基因工程亞單位疫苗對實驗小鼠的體液免疫水平。采用SAS軟件對試驗數據進行分析。-IgG為二抗，進行ELISA檢測實驗小鼠血清中抗體水平，并分析vp2基因工程亞單位疫苗對實驗小鼠的體液免疫水平。采用SAS軟件對試驗數據進行分析。
2 結果
2 結果
2.1 GPV vp2基因的原達表達
2.1 GPV vp2基因的原達表達
對pET30a-vp2進行IPTG誘導表達，SDS-PAGE與Western-blot試驗表明，在經考馬斯亮蘭染色的SDS-PAGE膠上和NC膜上均出現VP2特異性條帶（圖略），百未誘導的重組菌未出現特異條帶。
對pET30a-vp2進行IPTG誘導表達，SDS-PAGE與Western-blot試驗表明，在經考馬斯亮蘭染色的SDS-PAGE膠上和NC膜上均出現VP2特異性條帶（圖略），百未誘導的重組菌未出現特異條帶。
2.2 GPV重組VP2蛋白的體液免疫水平
2.2 GPV重組VP2蛋白的體液免疫水平
對采集的BALB/c免疫小鼠血清進行ELISA試驗檢測，每個樣品重復檢測三次，取平均值計算，詳見表1。經統計學分析表明，在三免后第2d，重組蛋白組和重組蛋白佐劑組免疫小鼠血清的OD450nm值均達到最高值，重組蛋白佐劑組與生理鹽水陰性對照組間差異極顯著（P
對采集的BALB/c免疫小鼠血清進行ELISA試驗檢測，每個樣品重復檢測三次，取平均值計算，詳見表1。經統計學分析表明，在三免后第2d，重組蛋白組和重組蛋白佐劑組免疫小鼠血清的OD450nm值均達到最高值，重組蛋白佐劑組與生理鹽水陰性對照組間差異極顯著（P
表1 免疫后BALB/c免疫小鼠血清中抗體消長變化（OD450）
表1 免疫后BALB/c免疫小鼠血清中抗體消長變化（OD450）
組別 一免前 二免前 三免前 三免后2d 三免后4d 三免后6d
組別 一免前 二免前 三免前 三免后2d 三免后4d 三免后6d
重組蛋白組 0.039±
重組蛋白組 0.039±
0.015 0.312±0.012 0.434±0.022 0.536±0.031 0.480±0.036 0.245±
0.015 0.312±0.012 0.434±0.022 0.536±0.031 0.480±0.036 0.245±
0.017
0.017
重組蛋白佐劑組 0.033±
重組蛋白佐劑組 0.033±
0.032 0.498±0.017 0.663±0.028 0.687±0.036 0.569±0.037 0.461±
0.032 0.498±0.017 0.663±0.028 0.687±0.036 0.569±0.037 0.461±
0.019
0.019
生理鹽水組 0.037±
生理鹽水組 0.037±
0.013 0.031±0.015 0.039±0.015 0.038±0.015 0.034±0.015 0.030±
0.013 0.031±0.015 0.039±0.015 0.038±0.015 0.034±0.015 0.030±
0.015
0.015
3 討論
3 討論
本研究以GPV的vp2基因為目的基因，以pET30a為表達載體，在體外高效表達了VP2蛋白，經重組蛋白免疫小鼠試驗發現，該重組蛋白具有免疫活性，重組蛋白佐劑組與陰性組間血清抗體水平差異極顯著，說明vp2基因可以作為基因工程疫苗的候選基因，而重組蛋白佐劑組與重組蛋白組間血清抗體水平差異顯著，提示佐劑對基因工程亞單位苗的免疫效果影響較大。由于本研究只是初步的預試驗，未進行攻毒試驗和鵝體內試驗，這將在下一步試驗中予以開展。本研究結果為GPV vp2基因工程疫苗的研制奠定基礎。
本研究以GPV的vp2基因為目的基因，以pET30a為表達載體，在體外高效表達了VP2蛋白，經重組蛋白免疫小鼠試驗發現，該重組蛋白具有免疫活性，重組蛋白佐劑組與陰性組間血清抗體水平差異極顯著，說明vp2基因可以作為基因工程疫苗的候選基因，而重組蛋白佐劑組與重組蛋白組間血清抗體水平差異顯著，提示佐劑對基因工程亞單位苗的免疫效果影響較大。由于本研究只是初步的預試驗，未進行攻毒試驗和鵝體內試驗，這將在下一步試驗中予以開展。本研究結果為GPV vp2基因工程疫苗的研制奠定基礎。
參考文獻
參考文獻
[1] 方定一.小鵝瘟的介紹[J].中國獸醫雜志,1962,8:19-20．
[1] 方定一.小鵝瘟的介紹[J].中國獸醫雜志,1962,8:19-20．
[2] le Gall-Recule, Jestin V,Chagnaud P.Expression of muscovy duck parvovirus capsid proteins (VP2 and VP3) in a baculovirus expression system and demonstration of immunity induced by the recombinant proteins [J].J GenVirol,1996,77(9):2159-2163.
[2] le Gall-Recule, Jestin V,Chagnaud P.Expression of muscovy duck parvovirus capsid proteins (VP2 and VP3) in a baculovirus expression system and demonstration of immunity induced by the recombinant proteins [J].J GenVirol,1996,77(9):2159-2163.
[3] 胡曉靜,潘杰,陳進喜,等.2株鵝細小病毒主要結構蛋白vp2基因的克隆和序列分析[J].現代農業科技,2008,(23):262-265.
[3] 胡曉靜,潘杰,陳進喜,等.2株鵝細小病毒主要結構蛋白vp2基因的克隆和序列分析[J].現代農業科技,2008,(23):262-265.
作者簡介：高旭(1977-)，男，吉林德惠人，博士，副教授，研究方向：動物病毒病分子生物學與免疫學。
2014年2月7日，上海市新發與再現傳染病研究所消息稱，H7N9禽流感基因疫苗已在上海初步完成研發，目前進入臨床試驗申報階段。
研究人員透露，疫苗的有效性和安全性還要進一步通過臨床評價來驗證。待三期臨床完成后，才有可能進入市場，至少需要6年時間，過程中仍存在一定風險。
康恩貝抗抑郁新藥獲批生產
據國家食藥監局網站最新信息，康恩貝3.1類新藥草酸艾司西酞普蘭片已獲批生產。該藥是目前全球廣為應用的抗抑郁一線藥物，2013年國內銷售總額超過1億元。
康恩貝此次精神類新藥獲批生產，可豐富公司的現有產品線，對未來業績產生積極作用。
俄羅斯研發出世界首個戒煙疫苗
日前，俄羅斯希姆基納米實驗室的科學家研究出世界第一種戒煙接種疫苗。接種這種疫苗可讓煙民永遠戒煙， 因為受種者機體會產生一種阻止尼古丁進入大腦的特殊抗體，這種抗體可以讓煙民不想吸煙。
目前，這種疫苗已成功通過第一階段試驗，進入臨床階段。
Devices器械
中國電信推出全球首款醫療診斷手機
近日，中國電信與瑞士企業LifeWatch聯合推出全球首款醫療診斷手機LifeWatchV，由中國云狐科技提供其移動醫療系統平臺。
該產品是一款搭載安卓系統的智能手機，內置7種不同的健康測試。用戶只需將拇指放在屏幕感應器上，手機就能開始身體檢測，包括心電圖、血糖、血氧以及心率等。
可監測血糖值隱形眼鏡問世
據谷歌公司官方消息，其目前正在測試一款具有高科技含量的隱形眼鏡，可以在佩戴后針對糖尿病患者眼淚中所含的糖分進行監測，隨時讓患者掌握自己的血糖水平。
這款智能隱形眼鏡內置了微型無線芯片和小型葡萄糖傳感器，目前處于臨床研發過程中，將來有望幫助糖尿病患者真正走出24小時動態監測血糖的痛苦。
可檢測肝癌化療效果的超聲系統問世
近日，日本兵庫醫科大學超聲波中心和東芝醫療的研究人員開發出一種可用于快速檢測肝癌患者化療效果的新型超聲檢測系統。
研究人員介紹，這套新型超聲檢測系統能夠自動追蹤病灶位置，檢測起來比較簡便。其檢測方法是，在肝癌患者接受化療一到兩周后，醫務人員將造影劑注射到患者血液中，然后采用超聲檢測系統進行觀察。造影劑流入腫瘤用時越長，說明化療藥物的效果越好，腫瘤正在縮小。
Technology技術
中國發現白血病抑癌新基因
中國科學家近期的一項研究發現了一個在急性白血病患者中有較常見突變的抑癌基因，且揭示了其功能異常與多種不同致癌基因之間的協同作用。
研究人員通過對一個混合譜系白血?。∕LL）患者及其正常同卵雙胞胎的血細胞進行全基因組測序，發現了罕見的功能性MLL-NRIP3致癌基因和H3K36三甲基化的組蛋白甲基轉移酶SETD2的遺傳突變。此項發現將促進對白血病乃至其他癌癥發病機制的認識，有助于臨床藥物開發。
中國經性感染艾滋病毒者發病更快
北京協和醫院感染內科李太生教授等人經過長達6年的研究證實，中國經性傳播途徑感染艾滋病病毒者，在未經干預情況下往往四五年發病，而非此前歐美研究者認為的平均需8年。
中國經性途徑感染艾滋病病毒者中，病毒亞型多為CRF01_AE，該亞型在感染其靶細胞時，須要借助“二傳手”，且選用輔助受體CXCR4當“二傳手”的比例要顯著高于其他亞型。CXCR4可能正是這些艾滋病病毒感染者更快發病的原因。
中國細胞轉分化研究獲新突破
滅活疫苗與活疫苗
菌苗和疫苗都是由微生物制成的生物制劑，接種于人體后，可誘生特異性免疫。我國習慣上把細菌、螺旋體生物制劑稱為菌苗，把病毒、立克次體、衣原體等的生物制劑稱為疫苗。
通常所用的疫(菌)苗有兩類：一是滅活疫(菌)苗，即把微生物培養物用物理或化學方法殺死而制成。二是減毒活疫(菌)苗，即將有毒力的微生物用人工定向變異的方法使其毒力減弱，或從自然界篩選出來的弱毒或無毒微生物制成活疫(菌)苗。
滅活疫(菌)苗的優點是：在使用上可單獨注射，也可幾種疫苗按一定比例混合注射，較易保存。保存期限為1年，注射后較安全。缺點是：注射次數多，初種至少需接種2次以上，注射劑量較大?？赡艹霈F發熱、全身或局部反應，其免疫效果也較差，不持久，常需數月或每年增強免疫一次。
活疫(菌)苗的優點是：其免疫作用較強，一般只需接種1次。接種劑量也較小，接種后反應小或無，接種后的免疫效果可靠而持久，一般可維持1～5年。缺點是：一般只宜單獨使用；疫苗不易保存，在普通冰箱內兩周即失效。
要特別注意制備活疫苗的病原減毒株的穩定性以及致癌等問題。因此，研制新發病原的疫苗時，由于對該病原的特殊性尚未完全了解，應先從制備滅活疫苗開始。
基因工程疫苗
基因工程是按照人類的愿望，通過基因重新組合得到新的生物品種的一種技術。這種基因工程方法制備生產的疫苗稱為基因工程疫苗。以乙肝疫苗為例，就是用基因剪切技術將調控乙肝表面抗原(HB―sAg)的這段基因剪切下來，裝到一個表達載體中，表達載體可以把這段基因的功能發揮出來；再把這種表達載體轉移到受體細胞內，如大腸桿菌或酵母菌等，最后再通過這些大腸桿菌或酵母菌的快速繁殖，產生出大量我們所需的乙肝疫苗。
過去，乙肝疫苗的來源，是以乙肝病毒攜帶者的血液為原料，把HB－sAg提取出來制成的，制造過程復雜，價格也較貴。而且這種血源性疫苗也不夠安全，它可能混有其他病毒的污染。同時，血液來源也是極有限的，遠不能滿足全國的需要?；蚬こ桃呙绲膯柺澜鉀Q了這一難題。
基因工程在醫學上已得到廣泛應用，并且應用領域不斷被拓寬，取得了令人驚喜的成就。
1 基因工程制藥
基因工程制藥開創了制藥工業的新紀元，解決了過去不能生產或者不能經濟生產的藥物問題。現在，人類已經可以按照需要，通過基因工程生產出大量廉價優質的新藥物和診斷試劑，諸如人生長激素、人的胰島素、尿激酶、紅細胞生成素、白細胞介素、干擾素、細胞集落刺激因子、表皮生長因子等。令人振奮的是，具有高度特異性和針對性的基因工程蛋白質多肽藥物的問世，不僅改變了制藥工業的產品結構，而且為治療各種疾病如糖尿病、腎衰竭、腫瘤、侏儒癥等提供了有效的藥物。眾所周知，醫治侏儒癥的良藥是人生長激素，倘若從人的尸體中獲取，治療一個病人就需要600具尸體的腦下垂體才能獲得足夠的量；倘若運用基因工程生產，就可從每升基因工程菌液中得到2．4g。人們為此而石破天驚的興奮!成本如此之低，又如此之高產，其巨大的經濟效益和社會效益，由此可見。
2 基因工程抗病毒疫苗
為人類抵御病毒侵襲提供了用武之地?；蚬こ桃倚透窝滓呙?、狂犬病疫苗、流行性出血熱病毒疫苗、輪狀病毒疫苗等應用于臨床，提高了人類對各種病毒病的抵御能力。比如，乙型肝炎病毒疫苗的問世，使我國新生兒不再遭遇乙型肝炎病毒的侵襲，也降低了人群肝癌的發病率。又如，為治愈癌癥正在研制的用單克隆抗體制成的“生物導彈”，就是按照人類的設計，把“生物導彈”發射出去，精確地命中癌細胞，并炸死癌細胞而不傷害健康的細胞。就單克隆細胞而言，單克隆細胞在腫癌的診斷檢測、顯示定位、監測病變、監測療效等方面也有重要價值。人類還通過基因工程生產抵御各種病菌、血吸蟲、虐原蟲等疫苗，提高人體對各種傳染病的免疫力。脫氧核糖核酸或者基因疫苗的問世，變革了機體的免疫方式。如今，人們翹首關注困擾人類的艾滋病病毒(人類免疫缺陷病毒)疫苗的早日問世?；蚬こ炭贵w技術的發展，為克服單克隆抗體生產細胞株在生產過程中的不穩定性，為生產大量高效抗病毒疫苗提供了先進的生產工藝。
3 基因工程治療疾病
臨床實踐已經表明，基因治病已經變革了整個醫學的預防和治療領域。比如，不治之癥——白癡病，用健康的基因更換或者矯正患者的有缺損的基因，就有可能根治這種疾病?，F在已知的人類遺傳疾病約有4000種，包括單基因缺陷和多基因綜合征。運用基因工程技術或者基因打靶的手段，將病毒的基因殺滅，插入校正基因，得以治療、校正和預防遺傳疾病的目的。人類精心設計的基因工程操作，克服了不同個體甚至物種之間由于器官移植所產生的免疫排斥作用，實現人體之間的移植已獲成功，成功的實體器官移植有腎、心、肝、胰、肺、腸，也有雙器官和多器官的聯合移植。而人體與動物之間的器官移植成為現實，臨床應用已是指日可待的事了。脫氧核糖核酸化學合成的完善和自動化，脫氧核糖核酸擴增技術的優化，為合成基因“探針”，提高臨床診斷的質量，是人類所殷切企盼的?；蛑委熡袃煞N途徑，一是體細胞的基因治療，二是生殖細胞的基因治療。體細胞的基因治療是將正常的遺傳基因導入受精的卵細胞內，讓這種遺傳物質進入受精卵的基因組內，并隨著受精卵分裂，分配到每一個子細胞中去，最終糾正未來個體的遺傳缺陷。而生殖細胞的基因治療是將人類設計的“目的基因”導入患有遺傳病病人的生殖細胞內，此法操作技術異常復雜，又涉及倫理，緩行之理充足，故尚無人涉足。
4 基因工程診病
