時間：2023-03-06 16:04:11
序論：在您撰寫鄉人大主席述職報告時，參考他人的優秀作品可以開闊視野，小編為您整理的7篇范文，希望這些建議能夠激發您的創作熱情，引導您走向新的創作高度。
我于XX年11月任**鄉黨委委員、人大主席。按照鄉黨委的分工，我主持鄉人大全面工作，先后分管產業開發、移民、林業、辦公室及內務后勤等工作。兩年來在鄉黨委政府的統一部署下，在抓好人大業務工作的的同時，大力推進了水產強鄉和林業興鄉步伐，努力維護庫區移民群眾的穩定和發展，取得了良好的成績，得到了人民群眾的認可，也提高了自身綜合素質。兩年來出勤865天，住鄉751天，下村715天，未請一天假?，F將我兩年來的德、能、勤、績、廉等情況向各位領導和同志匯報如下：
一、突出抓好水產養殖業，打造水產強鄉
水產養殖業是我鄉的主導產業，我已連續三年分管這項工作，現該產業已初具規模，全鄉網箱養魚總量已達到23000口（其中美國斑點叉尾鮰6450口），攔網養魚12處1600畝，養有各類品種18個，年成魚起水量6500噸，年產值達4000萬元。兩年來我主要開展的工作是穩產業、調結構、增效益。一是取得了重大魚病疫情防控工作的勝利。今年4月10日起，我鄉的美國斑點叉尾鮰爆發了以細菌性敗血癥和套腸病為主的重大魚病疫情，作為此次魚病防控工作的主要指揮人員，我與縣移民局和水產公司領導通力合作，連續奮戰45天，召開工作聯席會議15次，發動鄉村兩級干部60多人，深入到所有養殖戶網箱，全力開展魚病防控工作。保住存活成魚XX噸，處置清理死魚1360噸，取得了今年全國同類水庫魚病防控工作的最好成績，保住了60%的美國斑點叉尾鮰成魚，穩住了整個網箱養魚產業的健康發展。二是積極進行品種結構調整，化解養殖風險。為改變我鄉水產養殖業、品種單一、風險集中的情況，我與縣水產公司一道積極引導養殖戶進行了科學地品種結構調整，擴大了四大家魚的養殖量，引進了部分名特優魚種。引進了丁桂魚、加州鱸、翹魚、匙尾鱘等魚種，加大了鰱魚、青魚、草魚、鱖魚等養殖量，使養殖區域的品種結構逐步趨于合理。三是探索科學的產業發展模式，提高市場化程度、增加養殖效益。與縣移民局領導和公司人員一道，多次深入到養殖重點村、養殖大戶開展座談、調研，把水產養殖業的工作重點放在了提高產業發展的組織化和市場化程度、進行品牌化經營上來。開展了實施大庫攔網養魚和引進成魚加工廠等項目的前期籌備工作,正在撰寫推進五強溪庫區漁業發展的調研文章。
二、突出抓好山區林業，實施林業興鄉
**鄉是湖南省林業采伐制度改革試點鄉鎮之一，全鄉共有林地面積13.1萬畝，其中公益生態林9.8萬畝，活立蓄積量252438立方米，退耕還林及荒山造林11047畝，每年林農可獲得退耕還林等各項補貼290多萬元，全年商品材出材量在7000方左右，林農可獲益300萬元，林業也是我鄉繼水產養殖后的又一支柱產業。我分管林業工作也有兩年時間，在XX年全面完成林業采伐制度試點改革和集體林權制度改革任務后，今年上半年主要開展的工作就是認真落實《森林經營方案》，落實改革措施。主要開展了四項工作。一是把好林木采伐許可證的發放關，嚴格按照《森林經營方案》的要求，采取由林農提出采伐申請、村林業理事會進行公示，然后進行作業設計和審批，按照“陽光林業”的要求進行采伐計劃的分配和采伐證許可證的發放，目前已落實商品材采伐任務6500方；二是把好采伐跡地的植被恢復關，只砍不造或重砍輕造是林業采伐長期存在的弊端，為此，XX年我們實施了造林保金制度，并帶領林業站工作人員深入山場督促農戶煉山、造林，完成煉山面積XX畝，新造工業原料林1000畝，三邊綠化造林200畝；三是把好木材運輸證的檢尺關，XX年我們嚴格按按照《湖南省林木運輸證辦理程序》進行操作，要求每次商品材裝船裝車，林業站必須現場檢尺，村林業員到場監督，防治大面積的超方或木材走私現象，保證了國家稅費和林農的利益不受損失；四是把好山林糾紛的調處關，我鄉XX年還剩有16處2800多畝糾紛地沒有發證，為全面完成發證任務，我和林業站工作人員一道及時深入到山塊、村組進行調查和調處，現已完成調處任務7處1300畝面積，全年可全部完成任務。
一、 認真學習，努力提高自身素質
當今時代，要想服務于人民群眾，就必須認真學習理論知識，努力提高自身素質。為此，本人能不斷地學習“三個代表”重要思想和深入學習貫徹落實科學發展觀，以及學習黨的各項路線、方針、政策以及國家法律、法規、努力提高自身理論水平，提高執政能力。
二、 恪守職責，認真搞好本職工作
鄉鎮人大工作在人民心目中是一種修養職業，認為這個部門是可有可無的，但通過接觸，人大改變了我的觀念，知道這是一個負有重任的崗位，它要代表人民搞好各項監督、討論各項重要決策，參與經濟建設的實施。
半年來，我配合人大主席組織主席團成員和市、鎮人大代表視察了我鎮農房災后重建、“六進村”和村級活動場所建設等重點工程建設，聽取鎮人民政府劉昌海、梁成二位副鎮長的工作匯報，按照主席團的工作安排對學校工程、農村集中點建房等提出建議并指出不足及提出整改意見。二是能堅持走訪代表，收集各方面意見，為黨委的各項決策提供重要依據，同時也能提出一些參考意見和建議。能服從黨委安排，積極參加各項中心工作并能認真扎實地完成好。
三、 求真務實，勤政為民，認真搞好駐村工作
鄉鎮干部每年都要駐1—2個村，每年不管黨委安排我駐哪個村，我都能兢兢業業、努力工作，不但能很好完成黨委下達所駐村的各項任務，還能會同村干部一道解決一些疑難問題或辦一件實事。今年繼續駐慶云村并協助村兩委工作，結合新形勢、新任務，按照黨委政府“三級聯創”工作的安排意見，針對所駐村“兩委”班子現狀，協助村“兩委”召開班子會議，黨員群眾代表會議，廣泛征求意見，確定創建“五好”村黨支部的創建措施。同時，協助村“兩委”班子制定20__年精神文明及經濟發展計劃，做到目標明確、任務明確、職責明確。同時為擴大“五好”村黨支部創建的實效，按照市委組織部的要求，在全面繼續深入開展“黨員系列教育月”活動，在個別村組開展了“四培養”活動等，協助搞好村部的擴建工作積極引導做好該村鄉村旅游“農家樂”的開發。
四、 扎實推進災后重建工作
確保農村永久性住房建設有序進行農村工作是全部工作的基礎。為使廣大農村受災群眾早日住進經濟、實用、安全的永久性住房，積極協助黨委政府圍繞重心，出謀劃策。面對復雜的農村永久性住房重建工作，積極協助學校災后重建的拆遷、督促學校工程建設質量進度，認真抓好學校安全工作，搞好學校周邊環境整治、確保社會穩定。 “保安民、保穩定”是一項急迫的事情。隨著災后重建工作的持續推進，為讓群眾知曉政策、克服等、靠、觀、望的思想，我積極下鄉活動，走進田間地頭、向群眾宣傳政策、接受咨詢，引導和鼓勵受災農戶不等不靠，就地取材，進行重建。我所駐的__鎮慶云村，是我鎮的邊遠村，僅靠紅巖、敖平，為德陽、成都兩市的交界地方，在落實災后重建政策時難度較大，社會信息復雜，工作難度不可想象。在經過艱苦細致的工作，在駐村工作組村兩委的共同努力下，慶云村的災后建設取得了可喜成績，全村有住房680多戶，完成重建400多戶，取得了干部黨員滿意，受災群眾滿意，受到了黨委政府的肯定，全面的完成了農房的重建任務。
五、 廉潔自律，真心實意為服務
2007年9月21日上午，一場代表向選民述職的報告會在象山縣東陳鄉樟岙村會議室舉行，縣人大代表姜文武向選區的選民代表鄭重地述職。
這是東陳鄉人大自2006年實行代表向選民述職制度以來，組織舉行的第二場述職報告會。樟岙等13個村、70余位選民代表參加了會議。會上，縣人大代表姜文武，鄉人大代表王春娟、鮑宏友、徐亞紅分別向選民代表作述職報告。
真誠面對選民
2006年，象山縣東陳鄉人大根據有關法律規定，建立人大代表向選民述職制度。鄉人大召開主席團會議，要求8名縣人大代表、55名鄉人大代表任期內分別完成向選民述職的工作。還召開述職動員會，要求述職代表撰寫書面述職報告，并于規定時間內送鄉人大。東陳鄉人大代表向選民述職制度還規定，代表述職的主要內容是：對代表工作的認識和重視情況；出席會議情況，包括參加人代會聽取和審議鄉人大、鄉政府工作報告，審議表決各項決定、決議，依法選舉地方國家機關組成人員等情況；閉會期間參加視察、檢查、評議、座談等活動情況；走訪選民，聯系群眾，反映民意，為選民辦實事情況；履行代表職責的體會，以及存在的不足和今后的打算，等等。
述職報告會氣氛嚴肅認真。
鄉人大代表徐亞紅在2007年鄉人代會上領銜提出關于要求解決鄉中學生接送車問題、關于要求加大對水桶岙垃圾場治蠅治污治臭力度等建議，受到鄉政府重視，被列入重點實事工程予以解決。徐亞紅是民營企業的一名紡織女工，她經常利用休息日和晚上時間進村入戶，深入到選民中去，聽取選民意見，為解決選民的實際問題而奔走。她的述職報告事例充實，受到了選民代表的肯定。
鄉十五屆、十六屆人大代表王春娟先后在鄉人代會上領銜提出關于要求建造東陳自來水廠凈化池、關于要求加強南盤水庫水質污染整治力度、關于要求安裝盛寧線沙崗到南堡段路燈等12件建議，都得到了政府部門的認真辦理，贏得了選民的贊許。在述職報告會上，面對選民代表們的掌聲，王春娟鄭重地承諾：“選民給我的擔子，我一定要繼續挑好！”
與會選民代表充分肯定了姜文武等4位人大代表履行代表職務所取得的成績，并當場就建造松岙水庫、完善二輪土地承包等問題向人大代表提出了意見和建議。選民代表還要求人大代表要多擠出些時間到選民中去走一走、看一看、聽一聽，把老百姓的呼聲反映到縣、鄉人代會上，多為選民辦幾件看得見摸得著的實事。
做一名“陽光人大代表”
能面對面地監督人大代表履行職責情況，選民代表陳瑞棉感到十分高興。他認為，“人大代表為群眾做了哪些事情，是否履行應盡的職責，為民代言的能力怎么樣，這些問題以前對我們選民來說十分陌生。現在，通過代表向選民述職的形式，我們可以更好地了解和監督人大代表，這是對我們選民的尊重?！?/p>
選民代表勵加強十分感慨地說：“今天，我們選民評議人大代表，真真切切成了主人翁?！彼€說，“我以前也當過一屆鄉人大代表。從產生到屆滿，只有代表來監督政府及其部門，從來沒有選民來監督代表履職?，F在自己以選民的身份來評議監督人大代表，并把自己的訴求通過代表反映到人代會上去，反映到政府部門那里去，為我們選民解決實際問題，我們在監督代表的同時，自己也受到了教育?！?/p>
為了進一步加強人大代表與選民的聯系，提高人大代表的履職能力，充分發揮人大代表在各自工作崗位上的作用，達縣趙固鄉人大主席團于××年10月24日組織縣、鄉人大代表和部分選民參加縣、鄉人大代表的述職活動。
參加這次述職活動的縣、鄉人大代表和部分選民42人（其中：選民12人）。在這次述職活動中，有縣人大代表%%3人述職。參會代表認真聽取了3位代表的述職，并就他們的述職報告結合平時的工作情況進行了評議。
××同志作為縣人大代表和南井村支部書記，不僅認真做好自己的本職工作，加強黨員隊伍建設，發動黨員帶領全村人民發家至富；還經常關心和注意聽取群眾的呼聲，及時反映社情民意。200*年，他帶領全村人民走集約化農業道路，調整產業結構，取得了較好的成績，為我鄉的經濟發展積累了先進的經驗。
鄉人大代表××總結到，他在認真聽取人民群眾的呼聲的同時，認真做好本職工作。特別是分管的民政工作和計劃生育工作，在黨委政府的堅強領導下和全體工作人員的共同努力下均取得了較好的成績。一是加強干部監督和社會監督相結合的方式，不斷增強低保評議工作的透明度，深入到村社，實地走訪群眾，了解群眾疾苦，確保低保工作應保盡保；二是針對我鄉計劃生育工作思想認識提高難、超計劃生育統計難和違法生育處理的“三難問題”，加強政策宣傳和執法工作，有力地推動了計劃生育工作的落實。
大家下午好！
我鄉人大在縣人大常委會的關心指導下，在鄉黨委的堅強有力領導下，能夠從實際出發，圍繞發展中心，突出工作重點，扎實有效地開展人大工作?，F將我鄉今年的工作情況和下一步工作計劃匯報如下，不妥之處敬請各位領導和代表們批評指正。
一、開展規范化建設活動，夯實人大工作基礎
一是以村辦公室為陣地，建設“代表之家”。把全鄉的縣鄉人大代表劃分4個代表小組，按照便于代表活動的原則，以村辦公室為陣地，建設4個“代表之家”。二是加強制度建設，使人大工作正?；?。建立了人大代表學習制度、視察制度、聯系制度、評議制度和代表小組活動制度以及代表議案、建議辦理制度等六項制度。三是落實工作人員，規范人大檔案。
二、順利召開了我鄉十二屆人大三次會議
2009年4月份，在縣人大有關領導的親自指導下，在鄉黨委的領導下，根據法定程序，我鄉順利召開了鄉十二屆人大三次會議，圓滿完成了各項會議議程。
三、認真開展工作評議活動
2009年元月5日，在鄉黨委的高度重視下，在鄉政府的大力支持下，鄉人大組織市、縣人大代表和鄉人大代表團團長對鄉政府有關職能部門和鄉直有關單位進行了工作評議。人大代表們認真聽取了各部門主要負責人的工作述職，在公正、公開、公平的原則上，對8個參評單位進行了量化打分評比，并在評議大會上現場頒獎?？h人大常委會有關領導不僅親自參加了工作評議，而且在會上作了重要講話，對評議活動給予了高度評價。通過工作評議活動，人大代表們一致認為，鄉人大主席團事前工作安排周密，準備充分，各單位主要負責人對待工作評議態度積極，述職報告內容詳實。此項工作不僅能督促被評議單位改善服務質量、提高服務水平，更好地為群眾服務，還能提高被評議單位的對外形象，必將對我鄉經濟社會又好又快發展起到積極的推動作用。
四、圍繞發揮代表作用，積極開展代表調研視察活動
今年4月11日，鄉人大組織市、縣人大代表和鄉人大代表團團長進行了調研視察活動。鄉政府有關職能部門和鄉直有關單位負責人也參加了此項活動。通過對世華農業設施栽培、500千伏變電所和華光新農村等重點項目的調研視察。代表們一致認為，近年來我鄉農業產業結構調整力度在加大，世華農業設施栽培的發展填補了我鄉大棚蔬菜生產的空白；500千伏變電所的順利落地，提升了眾興鄉的對外形象；華光新農村建設的順利實施，凝聚著黨委的心血和政府的工作力度，徹底改善了項目建設區農民的生產、生活環境，有利于發展現代農業生產和旅游休閑產業，對眾興的經濟社會發展將起到積極的推動作用。此舉得到了縣人大有關負責人的充分肯定。
五、積極圍繞鄉黨委開展中心工作
今年以來，鄉人大在鄉黨委的領導下積極參加鄉中心工作。人大主席多次到村督察有關工作，并親自參與處理重點穩定工作，人大副主席不辭勞苦的戰斗在新農村建設的第一線，為華光新農村建設做出了大量的扎實有效的工作。
今年我鄉人大雖做了一些工作，取得了一定成績，但與人民群眾期望還有一定的距離，與上級的要求還有很大差距。面臨新的形勢和任務，下一步，我鄉人大將在縣人大常委會的關心、指導下，在鄉黨委的領導下，以更加務實的作風，圍繞發展中心，突出工作重點，注重工作實效，通過抓自身建設，抓代表活動，抓督查督辦，使人大工作進一步規范，人大代表的作用得到更好發揮，為推動基層民主政治建設，促進我鄉經濟社會又好又快發展，將著重做好以下幾個方面工作：
一是加強制度建設，促進人大工作規范化，夯實我鄉人大工作基礎；
二是圍繞社會熱點、難點問題，積極組織代表活動，計劃在11月份就新農村建設、工業聚集區發展、村村通工程、農業農村工作再次開展代表調研視察活動；
三是開展調研評議活動，發揮代表的監督作用。計劃在12月份對鄉政府辦站所和鄉直有關單位開展工作評議活動；
四是高度重視議案辦理，著力解決熱點難點問題。積極開展督查，推動政府中心工作，特別是在新農村建設、招商引資、工業經濟、文明創建、村村通工程等方面重點展開工作；
五是加強人大宣傳的信息報道工作，推進民主法制建設；
【關鍵詞】 川芎嗪注射液; 腹膜間皮細胞; 高糖; ⅰ型膠原; 基質金屬蛋白酶?1; 基質金屬蛋白酶抑制劑?1; 體外實驗
zhu gs, he js. j chin integr med. 2009; 7(1): 65?69.
received june 18, 2008; accepted july 22, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text link?out at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
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doi: 10.3736/jcim20090110open access
effects of ligustrazine injection on high glucose?induced type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase?1 and tissue inhibitor of metalloproteinase?1 expressions in human peritoneal mesothelial cells in vitro
gui?song zhu, jin?song he
department of nephrology, the affiliated drum tower hospital, nanjing university medical school, nanjing, jiangsu province 210008, china
objective: to investigate the effects of ligustrazine injection on type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase?1 (mmp?1) and tissue inhibitor of metalloproteinase?1 (timp?1) expressions in human peritoneal mesothelial cells (hpmcs) cultured in high glucose conditions.
methods: hpmcs were isolated from human omenta by trypsin digestion method and subcultured. then, the hpmcs were divided into normal control group, high glucose group and high glucose plus low?, medium? and high?dose ligustrazine (10, 20 and 40 mg/l ligustrazine respectively) groups. semi?quantitative reverse transcription?polymerase chain reaction was used to detect the expressions of type ⅰ collagen, mmp?1 and timp?1 mrnas in hpmcs. proteins of type ⅰ collagen, mmp?1 and timp?1 in culture supernatants were measured by enzyme?linked immunosorbent assay (elisa). cell protein concentration was measured by trace bicinchoninic acid method to correct the elisa assay results.
results: ligustrazine injection could significantly decrease high glucose?induced type ⅰ collagen and timp?1 expressions in a dose?dependent manner both in protein and gene levels (p<0.05, p<0.01). in addition, medium? and high?dose ligustrazine injection could significantly increase mmp?1 expression which was inhibited by high glucose concentrations (p<0.05).
conclusion: ligustrazine injection does not only decrease type ⅰ collagen synthesis, but also promote its degradation by modulating unbalanced mmp?1/timp?1 expression in hpmcs cultured in high glucose conditions.
keywords: ligustrazine injection; human peritoneal mesothelial cells; high glucose; type ⅰ collagen; matrix metalloproteinase?1; tissue inhibitor of metalloproteinase?1; in vitro
腹膜纖維化是腹膜透析治療的主要并發癥，最終導致腹膜功能衰竭，這是腹膜透析患者退出治療的主要原因［1］。腹膜纖維化以細胞外基質（extracellular matrix, ecm）的過度沉積為特點［2］。研究表明，ecm的過度沉積是由于ecm合成與降解失衡而引起［3］。ⅰ型膠原是腹膜纖維化中主要的ecm［4］，其降解過程受基質金屬蛋白酶?1（matrix metalloproteinase?1, mmp?1）及其特異性抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑?1（tissue inhibitor of metalloproteinase?1, timp?1）調控［5］。有研究證實，高糖能上調腹膜間皮細胞（human peritoneal mesothelial cells, hpmcs）ⅰ型膠原和timp?1的表達，降低mmp?1活性［3］。本研究通過觀察川芎嗪注射液對高糖刺激下hpmcs ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1表達的影響，探討川芎嗪在防治腹膜纖維化中的作用及其機制。
1 材料和方法
1.1 試劑和主要儀器 川芎嗪注射液（江蘇蘇中藥業集團股份有限公司，批準號為國藥準字h20020630）；50％葡萄糖注射液（江蘇方強制藥廠，批號為200710111）。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution, pbs）、胎牛血清（fetal calf serum, fcs）、trizol和rpmi?1640粉劑等（gibco公司）；胰蛋白酶和瓊脂糖粉等（promega公司）；ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1酶聯免疫吸附測定（enzyme?linked immunosorbent assay, elisa）試劑盒（adl公司）；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, bca）蛋白含量檢測試劑盒（南京凱基生物科技公司）；ⅰ型膠原、mmp?1、timp?1和β?actin引物，m?mlv第一鏈cdna合成試劑盒和taq酶等（invitrogen公司）；抗細胞角蛋白抗體、抗細胞波形蛋白抗體、第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體（北京中山生物技術有限公司）。nu?2500e二氧化碳培養箱（nuaire公司）；全自動酶標儀（biobank公司）；生物電泳圖像分析系統（上海復日科技有限公司）。
1.2 實驗方法
1.2.1 hpmcs的培養與鑒定 取來自南京大學醫學院附屬鼓樓醫院普外科擇期腹部手術患者（排除尿毒癥、腹膜炎）捐獻的大網膜組織，按文獻［3］方法原代培養hpmcs，按1?3傳代，第3代細胞用于實驗，每次實驗均由來自3個患者的標本進行3次獨立實驗。倒置相差顯微鏡觀察hpmcs呈多邊形，似鋪路鵝卵石樣外觀；免疫組化鑒定抗細胞角蛋白抗體和抗波形蛋白抗體染色陽性，抗第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體染色陰性。
1.2.2 實驗步驟和分組 hpmcs用含1％fcs的rpmi?1640培養液同步培養24 h后分為5組（每組設3個樣本）：正常組（完全培養液）、高糖對照組（2.5％葡萄糖）和高糖（2.5％葡萄糖）加低、中、高劑量川芎嗪（10、20和40 mg/l）組。各組完全培養液均為含有15％ fcs的rpmi?1640培養液。細胞置于37 ℃、5％ co2培養箱培養48 h。
1.2.3 elisa法檢測細胞上清液中ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1含量 分組干預48 h后，離心收集上清液，按elisa試劑盒說明書檢測ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1表達水平。用0.1 mol/l naoh溶解細胞沉淀，bca蛋白檢測試劑盒測定細胞沉淀中蛋白質濃度，用相應蛋白質濃度結果校正檢測結果。
1.2.4 半定量rt?pcr 分組處理同上。采用trizol一步法提取總rna，2 μg總rna進行逆轉錄合成cdna，50 μl反應體系進行pcr擴增，以β?actin作內參照（引物序列及反應條件見表1）。1.5％瓊脂糖凝膠電泳（110 v，15 min）進行pcr產物鑒定，電泳圖像分析儀掃描分析，mrna相對含量用其pcr產物吸光值（absorance, a）與β?actin a值的比值表示。引物及pcr反應條件見表1。
1.3 統計學方法 實驗數據用x±s表示，采用spss 15.0軟件進行統計分析，組間差異比較采用單因素方差分析，兩組間均數比較采用lsd?t檢驗。檢驗水準α=0.05。 表1 ⅰ型膠原、mmp?1、timp?1和β?actin引物序列及pcr反應條件
2 結 果
2.1 上清液中ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1蛋白質水平 與正常組比較，高糖對照組上清液中ⅰ型膠原和timp?1含量顯著升高（p<0.01），mmp?1含量顯著下降（p<0.01）；與高糖對照組比較，低、中和高劑量川芎嗪組上清液中的ⅰ型膠原和timp?1含量顯著降低（p<0.05, p<0.01），且兩者均呈量效關系，中、高劑量川芎嗪組上清液mmp?1含量顯著增加（p<0.01）。見表2。表2 各組上清液中ⅰ型膠原、mmp?1和timp?1蛋白質表達
2.2 hpmcsⅰ型膠原、mmp?1和timp?1 mrna的表達 與正常組比較，高糖對照組hpmcs ⅰ型膠原/β?actin mrna和timp?1/β?actin mrna分別上升（15.43±0.83）倍和（4.19±0.09）倍（p<0.01），mmp?1/β?actin mrna下降（86.9±0.44）%（p<0.01）；與高糖對照組相比，低、中、高劑量川芎嗪組ⅰ型膠原/β?actin mrna和timp?1/β?actin mrna表達水平均顯著下調（p<0.05），兩者均呈量效關系，中、高劑量川芎嗪組mmp?1/β?actin mrna表達顯著增加（p<0.05）。見圖1和圖2。
3 討 論
高糖透析液導致ecm過度沉積是腹膜纖維化的病理基礎［2］，研究表明，高糖不僅增加hpmcsⅰ型膠原的表達，并且引起ⅰ型膠原降解酶系mmp?1/timp?1的表達失衡［3］。我們的研究結果與之基本相同，此外我們發現，川芎嗪能顯著對抗高糖的上述作用。
在生理條件下，hpmcs可以產生一定量的ecm和mmps/timps［3, 6］。mmps是降解ecm的蛋白水解酶系，幾乎能降解全部ecm成分。timps是內源性分泌蛋白，作為mmps的特異性抑制因子，其n'端可與相應的mmps催化活性中心的鋅離子結合而抑制其催化活性［7］。本實驗通過研究川芎嗪對hpmcs在高糖刺激下主要ecm ⅰ型膠原及其降解酶系mmp?1/timp?1分泌及表達的影響，旨在探討川芎嗪對hpmcs在高糖環境下ⅰ型膠原的合成和降解的干預作用及其機制。結果顯示，川芎嗪能顯著降低高糖所致的ⅰ型膠原的過度合成，同時顯著下調timp?1的表達，增加mmp?1的表達，提示川芎嗪亦能通過調節mmp?1/timp?1的平衡，從而促進ⅰ型膠原的降解，減少ecm沉積。由此我們推測，川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用。
川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一，屬酰胺類生物堿，具有活血化瘀的功效。藥理實驗證明，川芎嗪具有擴張血管、改善微循環、調節免疫和鈣離子拮抗的作用［8］。目前川芎嗪抑制ⅰ型膠原、timp?1和增加mmp?1表達的機制尚不清楚。以往的研究發現這可能與抑制轉化細胞生長因子β1（transforming growth factor?β1, tgf?β1）表達有關［9, 10］。tgf?β1是重要的致纖維化細胞因子，參與了腹膜纖維化的病理過程［2］。tgf?β1可增加ⅰ型膠原的合成，并且抑制mmps的活性而激活timps，使ⅰ型膠原降解減少［3, 11］。有研究報道，川芎嗪能降低多種細胞如心肌細胞、肝細胞和血管內皮細胞的膠原合成和timp?1表達，而增加mmp?1的分泌和表達，進一步的研究發現這可能是通過抑制tgf?β/smads信號傳導通路繼而抑制tgf?β1表達的結果［9, 10, 12］。我們前期研究證實，川芎嗪能下調高糖致hpmcs tgf?β1的表達（文章待發表）。因此我們推測，川芎嗪抑制tgf?β1的表達可能是其抑制hpmcs ⅰ型膠原合成和調整mmp?1/timp?1表達平衡的機制之一，其具體機制將是我們下一步要研究的內容。
綜上所述，川芎嗪能抑制高糖致hpmcs ⅰ型膠原的過度合成，并且通過調節mmp?1/timp?1的平衡，促進ⅰ型膠原降解，從而減少ecm的沉積，防止腹膜纖維化的發生和發展。因此，川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用，這對腹膜纖維化的機制及其防治的研究有一定借鑒和應用價值。
【參考文獻】
1 plum j, hermann s, fussh?ller a, schoenicke g, donner a, r?hrborn a, grabensee b. peritoneal sclerosis in peritoneal dialysis patients related to dialysis settings and peritoneal transport properties. kidney int suppl. 2001; 78: s42?s47.
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【關鍵詞】 川芎嗪注射液; 腹膜間皮細胞; 高糖; ⅰ型膠原; 基質金屬蛋白酶1; 基質金屬蛋白酶抑制劑1; 體外實驗
zhu gs, he js. j chin integr med. 2009; 7(1): 6569.
received june 18, 2008; accepted july 22, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text linkout at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
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doi: 10.3736/jcim20090110open access
effects of ligustrazine injection on high glucoseinduced type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 and tissue inhibitor of metalloproteinase1 expressions in human peritoneal mesothelial cells in vitro
guisong zhu, jinsong he
department of nephrology, the affiliated drum tower hospital, nanjing university medical school, nanjing, jiangsu province 210008, china
objective: to investigate the effects of ligustrazine injection on type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 (mmp1) and tissue inhibitor of metalloproteinase1 (timp1) expressions in human peritoneal mesothelial cells (hpmcs) cultured in high glucose conditions.
methods: hpmcs were isolated from human omenta by trypsin digestion method and subcultured. then, the hpmcs were divided into normal control group, high glucose group and high glucose plus low, medium and highdose ligustrazine (10, 20 and 40 mg/l ligustrazine respectively) groups. semiquantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction was used to detect the expressions of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 mrnas in hpmcs. proteins of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 in culture supernatants were measured by enzymelinked immunosorbent assay (elisa). cell protein concentration was measured by trace bicinchoninic acid method to correct the elisa assay results.
results: ligustrazine injection could significantly decrease high glucoseinduced type ⅰ collagen and timp1 expressions in a dosedependent manner both in protein and gene levels (p<0.05, p<0.01). in addition, medium and highdose ligustrazine injection could significantly increase mmp1 expression which was inhibited by high glucose concentrations (p<0.05).
conclusion: ligustrazine injection does not only decrease type ⅰ collagen synthesis, but also promote its degradation by modulating unbalanced mmp1/timp1 expression in hpmcs cultured in high glucose conditions.
keywords: ligustrazine injection; human peritoneal mesothelial cells; high glucose; type ⅰ collagen; matrix metalloproteinase1; tissue inhibitor of metalloproteinase1; in vitro
腹膜纖維化是腹膜透析治療的主要并發癥，最終導致腹膜功能衰竭，這是腹膜透析患者退出治療的主要原因［1］。腹膜纖維化以細胞外基質（extracellular matrix, ecm）的過度沉積為特點［2］。研究表明，ecm的過度沉積是由于ecm合成與降解失衡而引起［3］。ⅰ型膠原是腹膜纖維化中主要的ecm［4］，其降解過程受基質金屬蛋白酶1（matrix metalloproteinase1, mmp1）及其特異性抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑1（tissue inhibitor of metalloproteinase1, timp1）調控［5］。有研究證實，高糖能上調腹膜間皮細胞（human peritoneal mesothelial cells, hpmcs）ⅰ型膠原和timp1的表達，降低mmp1活性［3］。本研究通過觀察川芎嗪注射液對高糖刺激下hpmcs ⅰ型膠原、mmp1和timp1表達的影響，探討川芎嗪在防治腹膜纖維化中的作用及其機制。
1 材料和方法
1.1 試劑和主要儀器 川芎嗪注射液（江蘇蘇中藥業集團股份有限公司，批準號為國藥準字h20020630）；50％葡萄糖注射液（江蘇方強制藥廠，批號為200710111）。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution, pbs）、胎牛血清（fetal calf serum, fcs）、trizol和rpmi1640粉劑等（gibco公司）；胰蛋白酶和瓊脂糖粉等（promega公司）；ⅰ型膠原、mmp1和timp1酶聯免疫吸附測定（enzymelinked immunosorbent assay, elisa）試劑盒（adl公司）；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, bca）蛋白含量檢測試劑盒（南京凱基生物科技公司）；ⅰ型膠原、mmp1、timp1和βactin引物，mmlv第一鏈cdna合成試劑盒和taq酶等（invitrogen公司）；抗細胞角蛋白抗體、抗細胞波形蛋白抗體、第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體（北京中山生物技術有限公司）。nu2500e二氧化碳培養箱（nuaire公司）；全自動酶標儀（biobank公司）；生物電泳圖像分析系統（上海復日科技有限公司）。
1.2 實驗方法
1.2.1 hpmcs的培養與鑒定 取來自南京大學醫學院附屬鼓樓醫院普外科擇期腹部手術患者（排除尿毒癥、腹膜炎）捐獻的大網膜組織，按文獻［3］方法原代培養hpmcs，按1︰3傳代，第3代細胞用于實驗，每次實驗均由來自3個患者的標本進行3次獨立實驗。倒置相差顯微鏡觀察hpmcs呈多邊形，似鋪路鵝卵石樣外觀；免疫組化鑒定抗細胞角蛋白抗體和抗波形蛋白抗體染色陽性，抗第ⅷ因子抗體和抗白細胞cd45抗體染色陰性。
1.2.2 實驗步驟和分組 hpmcs用含1％fcs的rpmi1640培養液同步培養24 h后分為5組（每組設3個樣本）：正常組（完全培養液）、高糖對照組（2.5％葡萄糖）和高糖（2.5％葡萄糖）加低、中、高劑量川芎嗪（10、20和40 mg/l）組。各組完全培養液均為含有15％ fcs的rpmi1640培養液。細胞置于37 ℃、5％ co2培養箱培養48 h。
1.2.3 elisa法檢測細胞上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1含量 分組干預48 h后，離心收集上清液，按elisa試劑盒說明書檢測ⅰ型膠原、mmp1和timp1表達水平。用0.1 mol/l naoh溶解細胞沉淀，bca蛋白檢測試劑盒測定細胞沉淀中蛋白質濃度，用相應蛋白質濃度結果校正檢測結果。
1.2.4 半定量rtpcr 分組處理同上。采用trizol一步法提取總rna，2 μg總rna進行逆轉錄合成cdna，50 μl反應體系進行pcr擴增，以βactin作內參照（引物序列及反應條件見表1）。1.5％瓊脂糖凝膠電泳（110 v，15 min）進行pcr產物鑒定，電泳圖像分析儀掃描分析，mrna相對含量用其pcr產物吸光值（absorance, a）與βactin a值的比值表示。引物及pcr反應條件見表1。
1.3 統計學方法 實驗數據用x±s表示，采用spss 15.0軟件進行統計分析，組間差異比較采用單因素方差分析，兩組間均數比較采用lsdt檢驗。檢驗水準α=0.05。 表1 ⅰ型膠原、mmp1、timp1和βactin引物序列及pcr反應條件
2 結 果
2.1 上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1蛋白質水平 與正常組比較，高糖對照組上清液中ⅰ型膠原和timp1含量顯著升高（p<0.01），mmp1含量顯著下降（p<0.01）；與高糖對照組比較，低、中和高劑量川芎嗪組上清液中的ⅰ型膠原和timp1含量顯著降低（p<0.05, p<0.01），且兩者均呈量效關系，中、高劑量川芎嗪組上清液mmp1含量顯著增加（p<0.01）。見表2。表2 各組上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1蛋白質表達
2.2 hpmcsⅰ型膠原、mmp1和timp1 mrna的表達 與正常組比較，高糖對照組hpmcs ⅰ型膠原/βactin mrna和timp1/βactin mrna分別上升（15.43±0.83）倍和（4.19±0.09）倍（p<0.01），mmp1/βactin mrna下降（86.9±0.44）%（p<0.01）；與高糖對照組相比，低、中、高劑量川芎嗪組ⅰ型膠原/βactin mrna和timp1/βactin mrna表達水平均顯著下調（p<0.05），兩者均呈量效關系，中、高劑量川芎嗪組mmp1/βactin mrna表達顯著增加（p<0.05）。見圖1和圖2。
3 討 論
高糖透析液導致ecm過度沉積是腹膜纖維化的病理基礎［2］，研究表明，高糖不僅增加hpmcsⅰ型膠原的表達，并且引起ⅰ型膠原降解酶系mmp1/timp1的表達失衡［3］。我們的研究結果與之基本相同，此外我們發現，川芎嗪能顯著對抗高糖的上述作用。
在生理條件下，hpmcs可以產生一定量的ecm和mmps/timps［3, 6］。mmps是降解ecm的蛋白水解酶系，幾乎能降解全部ecm成分。timps是內源性分泌蛋白，作為mmps的特異性抑制因子，其n'端可與相應的mmps催化活性中心的鋅離子結合而抑制其催化活性［7］。本實驗通過研究川芎嗪對hpmcs在高糖刺激下主要ecm ⅰ型膠原及其降解酶系mmp1/timp1分泌及表達的影響，旨在探討川芎嗪對hpmcs在高糖環境下ⅰ型膠原的合成和降解的干預作用及其機制。結果顯示，川芎嗪能顯著降低高糖所致的ⅰ型膠原的過度合成，同時顯著下調timp1的表達，增加mmp1的表達，提示川芎嗪亦能通過調節mmp1/timp1的平衡，從而促進ⅰ型膠原的降解，減少ecm沉積。由此我們推測，川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用。
川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一，屬酰胺類生物堿，具有活血化瘀的功效。藥理實驗證明，川芎嗪具有擴張血管、改善微循環、調節免疫和鈣離子拮抗的作用［8］。目前川芎嗪抑制ⅰ型膠原、timp1和增加mmp1表達的機制尚不清楚。以往的研究發現這可能與抑制轉化細胞生長因子β1（transforming growth factorβ1, tgfβ1）表達有關［9, 10］。tgfβ1是重要的致纖維化細胞因子，參與了腹膜纖維化的病理過程［2］。tgfβ1可增加ⅰ型膠原的合成，并且抑制mmps的活性而激活timps，使ⅰ型膠原降解減少［3, 11］。有研究報道，川芎嗪能降低多種細胞如心肌細胞、肝細胞和血管內皮細胞的膠原合成和timp1表達，而增加mmp1的分泌和表達，進一步的研究發現這可能是通過抑制tgfβ/smads信號傳導通路繼而抑制tgfβ1表達的結果［9, 10, 12］。我們前期研究證實，川芎嗪能下調高糖致hpmcs tgfβ1的表達（文章待發表）。因此我們推測，川芎嗪抑制tgfβ1的表達可能是其抑制hpmcs ⅰ型膠原合成和調整mmp1/timp1表達平衡的機制之一，其具體機制將是我們下一步要研究的內容。
綜上所述，川芎嗪能抑制高糖致hpmcs ⅰ型膠原的過度合成，并且通過調節mmp1/timp1的平衡，促進ⅰ型膠原降解，從而減少ecm的沉積，防止腹膜纖維化的發生和發展。因此，川芎嗪可能具有預防或延緩腹膜纖維化的作用，這對腹膜纖維化的機制及其防治的研究有一定借鑒和應用價值。
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