摘要:目的克隆廣藿香中廣藿香醇合酶(PTS)基因的cDNA序列,并構建其pRI101-PTS植物表達載體。方法利用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)獲得PTS基因的cDNA序列,利用生物信息學軟件對T-A克隆后的序列進行分析,預測其編碼蛋白的理化性質、結構和功能。以環形聚合酶延伸克隆(CPEC)構建pRI101-PTS過表達載體。結果PTS基因的開放閱讀框全長1659bp,編碼552個氨基酸。該蛋白分子量為64.1ku,等電點為5.39,含有DDxxD保守序列,具有2個倍半萜合酶結構域,C末端結構域268個氨基酸殘基可能涉及線性萜烯的環化,成功構建了pRI101-PTS過表達載體。結論PTS的克隆、植物過表達載體的構建及生物信息學分析為其他倍半萜類合成酶基因的發現和研究提供了參考,也為進一步研究其生物合成調控機制甚至代謝工程奠定基礎。
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