慢病毒介導炭疽毒素受體1基因靶向沉默對γ珠蛋白基因表達的影響

作者:徐琴; 李貴芳; 金婷婷; 李頔; 熊永紅; 安邦權; 黃盛文 貴州省人民醫院檢驗科; 貴州貴陽550002; 銅仁市人民醫院腫瘤科; 貴州銅仁554300; 貴州大學醫學院; 貴州貴陽550025

摘要:目的 探討沉默炭疽毒素受體1(anthrax toxin receptor 1,ANTXR1)基因對γ 珠蛋白基因表達的影響. 方法構建ANTXR1 基因特異性序列的shRNA 重組質粒及陰性對照重組質粒,經酶切驗證及測序鑒定后,將干擾載體和慢病毒質粒共轉染入293T 細胞后收集病毒上清液,再將其轉染至K562細胞中,并經puromycin 篩選穩轉細胞株.通過實時熒光定量PCR 技術檢測各組ANTXR1 基因和γ珠蛋白基因mRNA 的表達情況;通過Western 蛋白印跡技術檢測各組ANTXR1 蛋白和γ 珠蛋白的表達情況.采用t 檢驗進行統計分析. 結果 獲得有效干擾ANTXR1 基因的K562 穩轉細胞株,實時熒光定量PCR 結果顯示,ANTXR1-shRNA 實驗組中ANTXR1 基因和γ 珠蛋白基因mRNA 相對表達水平分別為0.19±0.02 和1.46±0.24;Western 蛋白印跡技術結果顯示,蛋白相對表達水平分別為0.20±0.01和1.45±0.14.ANTXR1-shRNA 實驗組與陰性對照組、空質粒載體組和空白對照組相比,ANTXR1 基因相對低表達,γ 珠蛋白基因相對高表達,差異均有統計學意義(P ﹤ 0.05). 結論靶向沉默ANTXR1基因后,促進γ 珠蛋白基因mRNA 和蛋白水平的表達.

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