摘要:目的:建立標準化的阿膠蛋白酶解條件。方法:分別通過加熱法、超聲法及液氮碾磨法提取阿膠蛋白;通過二氯甲烷-環己烷萃取和超濾法純化阿膠蛋白;采用序列分析級胰酶進行酶解,分別考察4個酶解參數(溫度、時間、酶的劑量和pH值)對酶解結果的影響,通過Tricine-SDS-PAGE法檢測酶解效果。結果:超聲法溶解阿膠樣品效果相對較好,酶解參數最佳條件為:酶解溫度38℃,pH 8.0,酶解時間12 h以上,底物與酶體積比在4:1-1:1范圍內,計算酶活為0.1-0.4 mU(mg/μmol)。結論:建立了標準化的阿膠肽圖前處理膠原蛋白胰酶酶解條件,為基于肽圖譜法阿膠鑒別及質量控制方法的建立打下基礎。
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