擴散序譜(DOSY)實驗測定緩沖體系中蛋白質表觀分子量
作者：李紅衛; 袁志良; 夏斌 北京大學北京核磁共振中心; 北京100871; 北京大學化學與分子工程學院; 北京100871; 北京大學生命科學學院; 北京100871
摘要：液體核磁共振擴散序譜(DOSY)可以通過測定溶質分子的自擴散系數(Dt)來研究該分子在溶液中的表觀分子量(M).Dt與測試體系和分子本身性質相關,蛋白質體系較為復雜,從而增加了蛋白質自擴散系數(Dt-protein)測定的難度.本文以3-(三甲基硅基)丙磺酸鈉(DSS)為內標,以蛋白質分子與DSS自擴散系數的比值(Dr)來表征蛋白質分子在溶液中的表觀分子量(Mprotein),該方法降低了緩沖體系對Mprotein的影響,使得Mprotein主要由分子本身的性質決定.在此基礎上,測定了不同分子量蛋白質分子相對于DSS的Dr,擬合得到了Dr與Mprotein的相關關系:lgMprotein=-2.6488 lgDr-0.7863,相關系數(R^2)為0.997.最后測定了通過大腸桿菌表達純化得到的SARS冠狀病毒主蛋白酶C端結構域(M^pro-C)分子相對于DSS的Dr,并計算出與文獻結果一致的Mprotein,進一步驗證了擬合公式的準確性和實用性.
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